2.2 定量分析方法

采用HPLC(1525-2707 TCM-2489色譜系統(tǒng)）、柱型C18(250 mm×4.6 mm,5μm），流動(dòng)相為甲醇-水洗脫體系，洗脫方法為：0～5 min用10%甲醇-水體系溶液平衡柱子，5～35 min由10%甲醇水溶液過渡到100%甲醇體系，進(jìn)行10%甲醇-100%甲醇體系梯度洗脫，45～48 min由100%甲醇過渡為10%甲醇-水體系，48～50 min用10%甲醇-水體系平衡柱子。上樣量1 m L，進(jìn)樣體積10μL，每個(gè)樣品運(yùn)行檢測時(shí)間為50min，柱溫30℃，檢測波長260 nm。

2.3 醇提物和單體化合物的保留時(shí)間與峰值

圖1為10 g/m L禿瘡花乙醇提取液HPLC分析色譜圖，橫軸是保留時(shí)間（單位是min），縱軸是電信號（單位是Au）。在保留時(shí)間22 min時(shí)有高強(qiáng)度色譜峰。圖2為同一條件下紫堇丁堿和異紫堇丁堿的色譜圖，其保留時(shí)間與禿瘡花醇提物一致。

2.4 含量分析

單體化合物的含量計(jì)算方法：設(shè)單體化合物的濃度梯度，經(jīng)HPLC分析，建立積分面積與濃度之間關(guān)系的回歸方程、線性關(guān)系和保留時(shí)間（見圖5和表3）；將醇提物中該物質(zhì)在某一濃度（如10 mg/m L）下的峰面積（y）代入回歸方程，計(jì)算出該物質(zhì)的質(zhì)量濃度x(mg/m L）；將x帶入物質(zhì)的含量計(jì)算公式，可得該單體化合物在原材料中的含量（注：根據(jù)前期試驗(yàn)，提取率按照平均為17%進(jìn)行計(jì)算）。禿瘡花中紫堇丁堿含量為0.79%、異紫堇丁堿含量為1.33%。

3 討論

利用峰面積與單體化合物濃度之間線性回歸方程和物質(zhì)的含量計(jì)算公式，計(jì)算出單體化合物在各自原材料中的含量。異紫堇丁堿占酸化氯仿相的48.9%，紫堇丁堿占酸化氯仿相的19.7%，兩者合計(jì)共占酸化氯仿相的68.6%；建立積分面積與濃度之間關(guān)系的回歸方程，紫堇丁堿y=16 369 907.7x-393 024.811(R2=0.999 872 719），禿瘡花中紫堇丁堿含量為0.79%；異紫堇丁堿y=13 281 438.44x-36 671.693 15(R2=0.999 834 091），禿瘡花中異紫堇丁堿含量為1.33%。

4 結(jié)論

建立禿瘡花中紫堇丁堿和異紫堇丁堿的同步提取分離制備方法，采用HPLC研究藥用植物禿瘡花中分離得到的同分異構(gòu)體在植物中的含量，并與粗提物保留時(shí)間對比定位，檢驗(yàn)試驗(yàn)工藝的可行性，初步建立HPLC同時(shí)測定生物堿的檢測方法。為進(jìn)一步研究禿瘡花的藥理活性和構(gòu)效關(guān)系提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)，為藥食同源植物中單體化合物含量的定量測定奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

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