應用Design—Expert8.0.6軟件對表3中數(shù)據(jù)進行二次多元回歸擬合，得到二次多項回歸方程

Y=5.21+0.34A+O.25B+0.31C-0.19D+0.38AC+0.17BC-0.22CD-0.19A₂-0.36B₂-0.27C₂-0.49D₂。

由表4方差分析結(jié)果可知，回歸模型的回歸效果顯著(P＜0.05)，線性系數(shù)較好(R²=0.9986)，說明建立的數(shù)學模型可以較好地描述實驗結(jié)果，能夠分析和預測響應值。表4中P值大小可以表明各因素對響應值的影響，結(jié)果表明：料液比(A)、提取時間(B)、超聲功率(C)和提取次數(shù)(D)四個因素對相應值的影響大小順序為即A＞C＞D＞B。

圖5是對牛舌革多糖提取的交互作用最顯著的兩個因素，料液比和提取次數(shù)的的響應面，其曲面較陡，而其他因素交互作用不顯著，表現(xiàn)為曲面較為平滑，DesignExpert8.0.6軟件為響應面分析提供了最佳條件優(yōu)化模塊，由軟件分析并考慮實際情況，將各因素條件取整，得到最佳提取工藝為：料液比為1∶40，提取時間為40min，超聲功率為200W，提取次數(shù)為3次時牛舌草多糖理論含量為l29.06mg/g。

3、驗證試驗

精密稱取牛舌草藥材粉末5g共3份置錐形瓶中，按篩選的最佳提取工藝提取，測定多糖含量，測得牛舌草多糖含量為128.36mg/g，與理論預測值誤差很小，說明該方程與實際情況擬合較好，所建模型正確，利用響應面分析法得到的牛舌草多糖提取條件真實可靠，具有實用價值。

4、牛舌草多糖體外抗DNA氧化損傷結(jié)果

用·OH誘導損傷DNA，會生成丙二醛(MDA)類似物，該物質(zhì)在酸性條件和TBA反應后產(chǎn)生的粉紅色物質(zhì)，在532nm處有最大吸收，因此，基于TBA法測定MDA類似物相對含量，能夠?qū)NA的損傷程度進行間接評估。如圖6所示，在0.2～2.0mg/mL濃度范圍內(nèi)，牛舌草多糖能夠抑制生成MDA類似物的形成，其效應具有濃度依賴性，在濃度達到1.6mg/mL時其抑制效應最高，對DNA的保護率達到57.38％，IC₅₀值為1.4mg/mL，提示牛舌草多糖對DNA氧化損傷具有一定的保護作用。

三、結(jié)論

植物多糖的提取方法主要包括加熱回流法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法等方法，不同提取方法采用的條件對植物多糖的提取率有較大的影響，所以需要對提取工藝參數(shù)進行優(yōu)化，以提高植物多糖的提取率。響應面法是基于合理的實驗設計方法并通過對得到的數(shù)據(jù)進行多元二次回歸方程分析來擬合因素與響應值之間的函數(shù)關(guān)系，尋求最佳工藝參數(shù)，響應面法可以更好地反映多個因素多水平之間的變化關(guān)系，已被廣泛地用于天然成分提取工藝的優(yōu)化。本實驗結(jié)合單因素試驗和響應面分析法對超聲輔助提取牛舌草多糖的工藝條件進行了優(yōu)化，獲得了最佳提取工藝條件，其最佳工藝為料液比為1∶40，提取時間為40min，超聲功率為200W，提取次數(shù)為3次，在此工藝條件下牛舌草多糖的得率為128.36mg/g，然而，在實際生產(chǎn)過程中要考慮溶劑消耗和回收耗能等問題，可以適當?shù)恼{(diào)整工藝。

DNA氧化損傷發(fā)生突變是導致衰老、癌癥等疾病發(fā)生的一個重要原因，活性氧對生物機體有毒害作用，毒性最大的是·OH，可以引起蛋白質(zhì)變性，DNA斷裂，而DNA作為人體重要的遺傳物質(zhì)，受損會引起染色體突變，畸形等。細胞內(nèi)過多的活性氧，如·OH、超氧陰離子等均是造成DNA氧化損傷的主要來源，因此，尋找天然的抗DNA氧化損傷化合物或者天然產(chǎn)物是一個研究方向，可以預防上述疾病的發(fā)生。本實驗通過紫外分光光度法測定了牛舌草多糖對·OH誘導的DNA氧化損傷的保護作用，結(jié)果表明牛舌草多糖具有顯著的抑制DNA氧化損傷作用，當濃度達到1.6mg/mL時，具有最佳保護作用，為牛舌草開發(fā)利用提供了一定的科學依據(jù)。

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