3結(jié)果與分析

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

如圖1香蘭素和乙基香蘭素的吸收光譜所示,兩者最大吸收峰均為233、279、308 nm,但由于在233 nm處,很多有機(jī)化合物均會(huì)存在吸收,因此會(huì)出現(xiàn)大量吸收峰的干擾,因此,233 nm不作為兩者定量檢測(cè)優(yōu)選波長(zhǎng)。

分別使用279 nm和308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了100μg/mL香蘭素和乙基香蘭素的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液測(cè)定,如圖2所示,采用308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí),相對(duì)于279 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng),目標(biāo)峰峰形對(duì)稱性好,信噪比高。

使用無添加純牛奶作為空白樣本,添加2μg/mL混合樣本,分別使用279 nm和308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)液相色譜圖如圖3所示,采用308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)具有更好的峰形和更高的信噪比。

綜合香蘭素和乙基香蘭素的化學(xué)性質(zhì),以及對(duì)標(biāo)準(zhǔn)混合工作液和試劑樣本的檢測(cè)的表現(xiàn),采用308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí),方法的檢測(cè)信號(hào)更強(qiáng)、干擾更低、信噪比更高,檢測(cè)性能更優(yōu)。因此后期檢測(cè)選擇308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2前處理?xiàng)l件優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)證明在酸性條件下,香蘭素和乙基香蘭素以游離酸的形式存在,使用含有5%的乙酸的乙腈溶液作為前處理溶液,能夠極大程度的保證香蘭素和乙基香蘭素釋放于溶液中,而且酸性條件下能充分的將樣本中脂肪及蛋白固化,通過離心的方式即可將脂肪與蛋白除去,將上清液過濾后進(jìn)樣,發(fā)現(xiàn)幾乎無雜質(zhì)影響檢測(cè)。

將離心后上清液使用正己烷進(jìn)一步脫脂后進(jìn)樣與簡(jiǎn)化前處理操作后直接進(jìn)樣比較,發(fā)現(xiàn)正己烷處理前后,待測(cè)物峰面積一致,說明簡(jiǎn)化的前處理方式能夠完全去除樣本中脂肪的干擾,故實(shí)驗(yàn)采取簡(jiǎn)化前處理方式。

3.3方法的線性范圍及檢出限

將系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣后,將峰面積Y(A)為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸如圖4所示。在0.1~100μg/mL濃度范圍內(nèi),香蘭素的線性回歸方程為Y=38.51X+1.15,r2=0.9999;香蘭素的線性回歸方程為Y=31.94X+0.75,r2=0.9999。表明2者的線性關(guān)系良好。

以3 S/N作為最低檢出限,測(cè)得香蘭素和乙基香蘭素的檢出限均為0.02μg/mL。

3.4回收率及精密度實(shí)驗(yàn)

取空白樣本18份,每份2 mL,每6份為一組,在1、5、20µg/mL 3個(gè)水平下進(jìn)行香蘭素和乙基香蘭素混合加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),測(cè)定結(jié)果見表1。如表1所示,香蘭素和乙基香蘭素的加標(biāo)回收率分別為97.0%~101.1%和96.0%~100.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。說明建立的高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定奶味飲料中的香蘭素和乙基香蘭素的方法回收率和精密度良好,具有可靠的檢測(cè)性能。

3.5實(shí)際樣品測(cè)定

應(yīng)用優(yōu)化好的方法進(jìn)行了奶味飲料中香蘭素和乙基香蘭素的含量測(cè)定,色譜圖5所示。香蘭素及乙基香蘭素均呈現(xiàn)出良好的吸收峰,且無干擾及拖尾峰存在,說明建立的聯(lián)合檢測(cè)的方法性能良好。

對(duì)市售的10種奶味飲料成品以及10種外賣購買奶茶樣品進(jìn)行了香蘭素和乙基香蘭素含量的測(cè)定,檢出情況如表2所示。檢測(cè)結(jié)果表明市面上奶味飲料中很多產(chǎn)品含有一定含量的奶味增加劑香蘭素和乙基香蘭素,對(duì)市場(chǎng)奶味飲料的質(zhì)量監(jiān)管具有一定的指導(dǎo)意義。

4結(jié)論

本研究建立了一種利用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定奶味飲料中的香蘭素和乙基香蘭素的檢測(cè)方法,結(jié)合香蘭素和乙基香蘭素的吸收光譜、空白樣本添加法檢測(cè)和實(shí)際樣本檢測(cè)結(jié)果,最優(yōu)的選擇308 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng);優(yōu)化了樣本的前處理方式,簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)條件,通過含有5%乙酸的乙腈溶液進(jìn)行樣本中香蘭素和乙基香蘭素的提取,有效的提取了目標(biāo)分析物,提高了檢測(cè)效率;香蘭素和乙基香蘭素在0.1~100μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.999,以3S/N作為最低檢出限,方法的檢出限均為0.02μg/mL;方法的加標(biāo)回收率分別為97.0%~101.1%和96.0%~100.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%,說明建立的高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定奶味飲料中的香蘭素和乙基香蘭素的方法回收率和精密度良好,具有可靠的檢測(cè)性能。

實(shí)驗(yàn)表明,新建立的方法檢測(cè)效率極大提升、回收率及精密度高、可推廣性強(qiáng),對(duì)市場(chǎng)奶味飲料中的奶味增加劑的監(jiān)管和檢測(cè)具有重要的意義。

聲明：本文所用圖片、文字來源《食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)》2020年9月，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系

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