2.3 線性范圍和定量限

將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，（濃度范圍為2～100ng/mL），在本方法所確定的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分析，以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)作圖建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，四種化合物線性方程見(jiàn)表3，結(jié)果表明四種化合物在2～100ng/mL范圍內(nèi)線性決定系數(shù)均大于0.995。根據(jù)3倍信噪比，并計(jì)入試樣量和定容體積，計(jì)算檢出限，定量限則根據(jù)10倍信噪比計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表3，從表中可以看出乳粉等固體樣品中麥芽酚和乙基香蘭素定量限為2μg/kg，乙基麥芽酚定量限為4μg/kg，香蘭素定量限為8μg/kg，均低于10μg/kg。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

采用液質(zhì)聯(lián)用分析復(fù)雜基質(zhì)時(shí)通常存在基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果有重要影響，因此需要考察本方法的基質(zhì)效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)以陰性的8種基質(zhì)按照方法分別進(jìn)行提取凈化，用得到的凈化液配制50ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品，每種做3個(gè)平行，將得到的響應(yīng)值的平均值和純?nèi)軇┡渲频?0ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)值進(jìn)行比較，通過(guò)二者比值來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)，得出目標(biāo)化合物在8種基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)。四種化合物在各種乳制品中的基質(zhì)效應(yīng)在80%～100%的范圍內(nèi)，具體結(jié)果見(jiàn)表4。說(shuō)明乳制品基質(zhì)對(duì)四種化合物存在微弱的基質(zhì)抑制效應(yīng)，實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中可采用溶劑配制曲線直接定量。本方法基質(zhì)效應(yīng)低于水體系提取固相萃取柱凈化方法，說(shuō)明前處理取得了很好的凈化效果。這主要是因?yàn)榧尤氪罅康牧蛩徕c形成鹽析使蛋白質(zhì)沉淀，通過(guò)堿液反萃可有效去除脂肪等不溶于堿性水溶液的有機(jī)化合物雜質(zhì)，從而顯著降低基質(zhì)效應(yīng)，有助于更準(zhǔn)確的定量。

2.5 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

在上述確定的色譜條件和前處理?xiàng)l件下，在未標(biāo)注添加食用香精的不同基質(zhì)中添加三個(gè)不同濃度水平的香料進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，其平均回收率與精密度見(jiàn)表5，從表中可以看出，四種化合物在各基質(zhì)中三種濃度水平下，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.5%～11.9%，除煉奶和黃油外，其它基質(zhì)中平均回收率在80.4%～104.8%之間，加標(biāo)回收率和精密度均符合GB/T27404-200的要求，整個(gè)結(jié)果表明本方法檢測(cè)穩(wěn)定性較好。煉奶和黃油的回收率相對(duì)偏低，平均回收率在67.7%～84%之間，可能是由于煉奶基質(zhì)較為粘稠，提取效率低，而黃油在加熱溶解過(guò)程中易造成目標(biāo)物的損失，此兩種乳制品中四種香料化合物的測(cè)定應(yīng)采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正。

2.6 與其它方法的比較

針對(duì)奶粉中四種香料化合物的檢測(cè)，將所建立的方法與文獻(xiàn)報(bào)道中的方法進(jìn)行比較（表6），結(jié)果表明，此方法具有靈敏度高（檢出限為0.6～2.4μg·kg^-1），分析時(shí)間短，基質(zhì)效應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)。

2.7 實(shí)際樣品分析

應(yīng)用該方法對(duì)市售15件乳制品樣品（4份樣品標(biāo)注添加食用香精，1份奶粉樣品標(biāo)注添加香蘭素）進(jìn)行分析測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7，由結(jié)果可知，標(biāo)注添加食用香精樣品確實(shí)檢出了四種香料中的一種或多種，說(shuō)明了此四種化合物在乳制品中的應(yīng)用較為廣泛。需要注意的是，GB2760-2014規(guī)定發(fā)酵乳不得添加食用香精香料，但是有的乳制品生產(chǎn)企業(yè)按照GB19302—2010生產(chǎn)的酸奶配料表仍含有食用香精，此外，麥芽酚在多個(gè)未標(biāo)注添加香精的乳制品中有檢出，而其它三種香料化合物在未標(biāo)注添加香精均未檢出，可能是因?yàn)樵谌橹破窡峒庸み^(guò)程中，發(fā)生美拉德反應(yīng)生成麥芽酚，不同樣品麥芽酚含量差異較大，應(yīng)研究其內(nèi)源性產(chǎn)生的麥芽酚水平以便制定合適的限量值以判斷是否有額外添加。

3 結(jié)論

綜上所述，本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定乳制品中麥芽酚、乙基麥芽酚、香蘭素和乙基香蘭素含量的方法，前處理采用水-叔丁基甲醚提取，氫氧化鈉溶液反萃實(shí)現(xiàn)富集和凈化后調(diào)酸分析。此方法前處理成本低，快速高效，凈化效果好，儀器分析時(shí)間短，靈敏度高，四種化合物在各種乳制品中呈弱基質(zhì)抑制效應(yīng)，無(wú)需采用基質(zhì)曲線或者內(nèi)標(biāo)校正補(bǔ)償其基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明該檢測(cè)分析方法穩(wěn)定、可靠、易于推廣，可應(yīng)用于不同乳制品中四種香料化合物的檢測(cè)，有望為相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

相關(guān)鏈接：叔丁基甲醚，乙基麥芽酚，香蘭素，乙基香蘭素

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