2 結(jié)果與討論

2.1 浸提溶劑的選擇

雙酚A易溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯等有機溶劑，難溶于水。樣品于37℃循環(huán)浸提，甲醇、丙酮的沸點低于乙醇、苯（毒性較大），有利于樣品浸提液濃縮處理；丙酮沸點雖較甲醇低，但樣品不耐受丙酮。因此選擇甲醇作為替代溶劑模擬臨床使用對雙酚A進行加嚴(yán)浸提。

2.2 檢測波長的優(yōu)化

采用高效液相色譜熒光法對雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液的激發(fā)波長（210～300nm）及發(fā)射波長（280～400nm）進行光譜掃描。結(jié)果表明，雙酚A的最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為232、314nm。

2.3 樣品預(yù)處理方式的選擇

取血液透析器端蓋及外殼部分剪成小塊樣品，以甲醇為浸提溶劑，按照1g樣品-10mL甲醇的比例浸提，分別采用超聲和振蕩兩種方式浸提。采用甲醇對樣品進行10、20、30min超聲浸提，分別超聲浸提3次，試驗結(jié)果表明三次超聲浸提均未達(dá)到極限浸提。另將樣品于控制型控溫?fù)u床振蕩（37℃，200r/min）浸提5、24h，測得浸提液中雙酚A的濃度分別為8.58、27.58ng/mL，說明雙酚A的溶出量隨浸提時間的增加而增加。

通過上述試驗表明超聲浸提及振蕩浸提時樣品中雙酚A均不能達(dá)到極限浸提，無法準(zhǔn)確測定樣品中雙酚A的殘留量，故采用模擬臨床使用的方式進行樣品預(yù)處理。

2.4 專屬性試驗

分別取空白供試液、雙酚A對照品溶液及樣品供試液，按照1.3色譜條件進行測定。試驗結(jié)果表明，雙酚A對照品的保留時間約為21.5min，樣品供試液中雙酚A的保留時間與雙酚A對照品的保留時間基本一致。雙酚A的色譜峰峰形良好且與鄰近色譜峰分離度均大于1.5，空白供試液及樣品供試液對本實驗分析均無干擾，滿足試驗要求，方法專屬性良好。雙酚A對照品溶液色譜圖見圖3

2.5 線性方程、檢出限與定量限

按照1.3色譜條件測定1.2配制的雙酚A系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以雙酚A的質(zhì)量濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。計算得到雙酚A在質(zhì)量濃度為51.2～1024ng/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性回歸方程為y=0.0652x-0.7942，線性相關(guān)系數(shù)為0.9999。

用甲醇稀釋1.2配制的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲備液并進行測定，以3倍的信噪比（S/N）計算檢出限，10倍的S/N計算定量限，得到該方法下雙酚A的檢出限與定量限分別為10.8、51.2ng/mL。

2.6 加標(biāo)回收與精密度試驗

在樣品浸提液基質(zhì)中分別添加低、中、高濃度的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取樣品加標(biāo)浸提液100mL旋蒸至干，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，渦旋至殘渣完全溶解，用0.45μm濾膜過濾，得樣品加標(biāo)供試液。3個加標(biāo)水平分別為51.50、103.0、206.0ng/mL，每個加標(biāo)水平平行測定6次，結(jié)果見表2。由表2可知，雙酚A在3個濃度水平的平均加標(biāo)回收率為90.23%～104.21%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8318%～3.661%，表明該方法的準(zhǔn)確度及精密度良好，均符合《中國藥典》2020版9101分析方法驗證指導(dǎo)原則中的指標(biāo)要求。

2.7 樣品測定

采用本方法對血液透析器平行測定三組，將測定結(jié)果代入式(1)，計算其臨床接觸量，結(jié)果見表3。

式中：W—每套樣品中雙酚A臨床接觸量，μg；

           c—樣品供試液中雙酚A質(zhì)量濃度，ng/mL。

由表3結(jié)果可知，每套血液透析產(chǎn)品中雙酚A的最大臨床接觸量為1.386μg。根據(jù)GB/T16886.17—2005《醫(yī)療器械生物學(xué)評價　第17部分：可瀝濾物允許限量的建立》對血液透析器中雙酚A允許限量進行評估，本方法對血液透析器中雙酚A的測定值在允許限量范圍內(nèi)。

3 結(jié)語

建立了血液透析器中雙酚A的浸提方法，采用高效液相色譜熒光法測定血液透析器中雙酚A的溶出量。該方法專屬性強、靈敏度高、精密度及準(zhǔn)確度好，可用于血液透析器安全性風(fēng)險評估，為監(jiān)管部門提供技術(shù)支持。

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