隨著人口老齡化，急慢性腎病的患病率在全球范圍內(nèi)呈逐年上升的趨勢。腎衰竭已成為各國關(guān)注的疾病問題，目前臨床腎臟替代療法主要有血液透析、腹膜透析和腎臟移植。由于腎臟移植價格昂貴，血液透析為主要的腎臟替代治療方式。
血液透析系統(tǒng)主要包括血液透析機、水處理系統(tǒng)、血液透析器和透析液。血液透析器是血液透析系統(tǒng)的關(guān)鍵部分，又被稱為“人工腎”，是血液凈化的場所。血液透析器在使用過程中與人體血液及透析液均直接接觸，為三類高風險器械，所以需對其進行溶出物研究，以評價血液透析器的安全有效性。

血液透析器由空心纖維透析膜、殼體、密封層組成，其中殼體多為聚碳酸酯材質(zhì)，空心纖維透析膜常用聚砜、聚醚砜、聚酰胺、醋酸纖維素等膜材。聚碳酸酯及聚醚砜的主要合成原料為雙酚A，是一種內(nèi)分泌干擾物，據(jù)研究表明塑料制品使用時釋放出的雙酚A被引入人體后可能會導(dǎo)致糖尿病、心腦血管及生殖系統(tǒng)等疾病，從而影響身體的正常機能。基于雙酚A的安全風險，中國、美國、歐盟等國家限制了其在奶瓶及食品包裝材料中的應(yīng)用。腎衰竭患者在進行透析治療時血液及透析液均與血液透析器直接接觸，血液透析器聚碳酸酯外殼及聚砜透析膜中的雙酚A單體可能會遷移至患者血液，從而給患者帶來較高的風險，所以需對血液透析器中雙酚A的溶出量進行研究。

目前，雙酚A測定有色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、電化學分析法、免疫分析法、熒光分析法等。AstridBacle等對透析器中雙酚A的測定采用固相萃取-超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，操作復(fù)雜且成本較高，不易于方法的普及。電化學分析法是基于溶液電化學性質(zhì)的化學分析方法，選擇性較差，測定時需特殊修飾的電極。免疫分析方法有較高的靈敏度和選擇性，但抗體制備成本較高且周期長。于杰等采用高效液相色譜熒光法測定食品包裝材料中雙酚A的遷移量。目前，高效液相色譜熒光法測定雙酚A尚未應(yīng)用于醫(yī)療器械領(lǐng)域，并且聚砜中空纖維膜中雙酚A的溶出研究鮮有報道。由于樣品基質(zhì)較為復(fù)雜，分析測定時干擾較多，鑒于高效液相色譜熒光法具有較高的靈敏度、準確性、選擇性及重復(fù)性等特點，筆者選用該方法用于聚碳酸酯及聚砜中空纖維膜中雙酚A溶出量的測定，以甲醇為替代溶劑，模擬臨床使用條件加嚴浸提血液透析器中的雙酚A，采用乙腈和醋酸銨緩沖鹽為流動相，通過優(yōu)化浸提條件及色譜條件等相關(guān)因素，建立靈敏、高效、準確的測定方法，可用于評估血液透析器中雙酚A溶出量，為該類產(chǎn)品安全性風險評估提供數(shù)據(jù)支持，為監(jiān)管部門提供技術(shù)支持。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：1260型，配熒光檢測器，美國安捷倫科技有限公司。滾壓泵：JHBP-2000型，廣州市暨華醫(yī)療器械有限公司。pH計：SevenExcellence型，梅特勒-托利多控股有限公司。數(shù)顯電子恒溫水浴鍋：HH-8型，常州國華電器有限公司。超純水系統(tǒng)：Milli-QA10型，美國密理博公司。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RV10control型，德國IKA集團。數(shù)控超聲波清洗器：KQ3200DE型，昆山市超聲儀器有限公司?？刂菩涂販負u床：KS4000icontrol，德國IKA集團。雙酚A對照品：純度為99.8%，編號為30074，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。甲醇、乙腈：色譜純，德國默克公司。醋酸、醋酸銨：分析純，國藥集團化學試劑有限公司。實驗用水為超純水。

1.2 溶液配制

雙酚A系列標準工作溶液：精密稱取雙酚A對照品10.62mg于50mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解、稀釋、定容，得質(zhì)量濃度為102.4μg/mL的標準儲備液，采用逐級稀釋法分別配制質(zhì)量濃度為51.2、102.4、204.8、409.6、1024ng/mL的雙酚A系列標準工作溶液。醋酸銨緩沖溶液：精密稱取1.54g醋酸銨于1L容量瓶中，用水溶解、稀釋、定容，用醋酸調(diào)節(jié)pH至4.0。

1.3 色譜條件

色譜柱：WatersBEHShieldRP18型色譜柱［150mm×4.6mm，3.5μm，沃特世科技（上海）有限公司］；激發(fā)波長：232nm；發(fā)射波長：314nm；柱溫：30℃；進樣體積：10μL；流動相：A相為乙腈；B相為醋酸銨緩沖溶液，梯度洗脫條件列于表1。

1.4 樣品預(yù)處理

參照血液透析器臨床使用說明，按圖1所示連接血液透析器及硅膠管路，分別形成2個獨立的循環(huán)系統(tǒng)，在玻璃燒杯中各加入1000mL超純水，通過滾壓泵注滿整個閉路系統(tǒng)，以200mL/min的流量分別沖洗血液透析器血液側(cè)與透析液側(cè)，沖洗完畢后吹入氮氣去除血液透析器中的液體。按圖2所示連接血液透析器及硅膠管路形成閉合循環(huán)系統(tǒng)，溶劑瓶中加入500mL甲醇，通過滾壓泵在（37±1）℃下以200mL/min的流量循環(huán)5h，循環(huán)完畢后將硅膠管路及血液透析器中浸提液轉(zhuǎn)移至溶劑瓶，溶劑瓶中加入甲醇至溶液體積為600mL，即得樣品浸提液。取500mL甲醇于溶劑瓶，使用硅膠管形成閉合循環(huán)回路，通過滾壓泵在（37±1）℃下以200mL/min的流量循環(huán)5h，將循環(huán)管路中甲醇轉(zhuǎn)移至溶劑瓶，溶劑瓶中加入甲醇至溶液體積為600mL，即得得空白對照液。分別量取空白對照液和樣品浸提液100mL旋蒸至干，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，渦旋至殘渣完全溶解，用0.45μm濾膜過濾，得空白供試液和樣品供試液。

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