米粉，以大米為主要原料，經浸泡、蒸煮、壓條等工序制成的條狀、絲狀米制品，深受廣大消費者的喜愛，歷史比較悠久，據傳是古代中國五胡亂華時期北方民眾避居南方而產生的食品。嬰幼兒米粉（又稱嬰幼兒米糊），以大米、小米為主要原料，添加適量的營養(yǎng)強化劑，加工制成的適合6個月以上嬰幼兒的補充營養(yǎng)的輔助食品，是嬰幼兒谷類輔助食品之一，品種繁多，是不少嬰幼兒比較喜愛和家庭常見的食物。作為人工合成的第一種香料，天然的香蘭素產量較低，且價格較貴，隨著科技的不斷進步，香蘭素的產量每年都在增加，2019年全球香蘭素產量約2萬噸，其中中國約占70%，中國是目前世界上香蘭素和乙基香蘭素最大的生產國和消費國，作為在食品生產中廣泛使用的可食用香料，香蘭素和乙基香蘭素主要作用是使食品產生獨特的奶香味及香子蘭的氣味，增進人的食欲，提高食品質量；恢復食品香味，強化特征味道；消殺食品中的不良味道。在國家標準GB2760—2014《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中規(guī)定，0～6個月的嬰幼兒配方食品不得添加任何食品用香料，香蘭素在嬰幼兒谷類輔助食品中可以使用，但最大使用量不得超過7mg/100g，美國食品香料與萃取物制造者協(xié)會（FEMA）建議軟飲料中的香蘭素的用量6.3mg/100g，目前對香蘭素和乙基香蘭素沒有相應的國家檢測標準和方法，香蘭素和乙基香蘭素雖然是很安全的食品添加劑，但加了超量香蘭素的米粉可能會影響嬰幼兒對此類食品的依賴性，而且大劑量攝入香蘭素可能致人體肝腎損害，尤其是嬰幼兒。米粉中，尤其是嬰幼兒米粉中，不少生產企業(yè)為了產品有更好的口味，在產品中添加了香蘭素，生產企業(yè)能否嚴格按標準規(guī)定要求使用對整個食品行業(yè)的發(fā)展，也和我們每個人的身體健康密不可分。根據相關報道和文獻資料，目前對食品中香蘭素和乙基香蘭素檢測液相法或液質法較多，而氣相法較少，液相法或液質法中處理樣品所用的有機試劑較多是已烷或乙腈，本方法主要探討利用安捷倫7890B氣相色譜FID檢測器，用乙醇（相較于已烷或乙腈，更安全）為提取液，已酸乙酯作為內標，優(yōu)化色譜條件，實現了香蘭素和乙基香蘭素兩種物質的分離，方法靈敏準確、操作簡單，是定量檢測米粉中香蘭素和乙基香蘭素含量的理想方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀：安捷倫7890B（配有FID檢測器，7693液體自動進樣器和150位進樣盤）；旋渦混合器XW-80A：上海弛唐電子有限公司；旋渦混合器XW-80A：賽默飛世爾；分析天平ME204T/02：梅特勒儀器有限公司。

香蘭素（C₈H₈O₃，CAS：121-33-5，色譜純）、乙基香蘭素（C₉H₁₀O₃，CAS：121-32-4，色譜純）：上海易恩化學技術有限公司；已酸乙酯（C₈H₁₆O₂，CAS：125-66-0，色譜純）、乙醇（C₂H₄O，CAS號：64-17-5.色譜純）：上海麥克林生化科技有限公司；有機相相針式濾器（尼龍）：100只/罐，13mm，0.22μm，上海安譜實驗科技有限公司。

1.2 色譜條件

檢測器溫度：300℃，進樣口溫度：270℃；進樣量1µL（襯管為5190～2295），分流進樣，分流比5∶1，色譜柱：DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）；柱箱：90℃（2min）-10℃/min升至220℃（5min），后運行280℃（1min）。

1.3 標準溶液

1.3.1 已酸乙酯、香蘭素、乙基香蘭素標準溶液儲備液（1000µg/mL）

分別準確稱取0.1g已酸乙酯、香蘭素、乙基香蘭素至100mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，混勻，0～4℃低溫冰箱密封保存。

1.3.2 分別吸取香蘭素、乙基香蘭素標準儲備溶液0.05、0.10、0.25、0.40、0.50mL

分別準確稱取于10mL的容量瓶中，加入0.2mL已酸乙酯，以乙醇定容至刻度，依次配制成香蘭素、乙基香蘭素標準溶液為5、10、25、40、50µg/mL系列混合系列內標標準工作液，現用現配。

1.4 試樣制備及測定

稱取混合均勻的米粉樣品2g（精確至0.001g）于15mL離心管中，加入10mL乙醇，加入0.2mL已酸乙酯標準溶液儲備液，渦旋混勻2min，10000r/min離心5min，再用0.22µm氣相濾頭過濾于進樣瓶中，待測。同時做空白試驗。

2 結果和分析

2.1 實驗條件的優(yōu)化

2.1.1 氣相色譜條件的選擇

氣相色譜條件的選擇和優(yōu)化主要涉及到儀器的檢測器、進樣口和毛細管柱及其升溫程序、柱流速，目前實驗室常用的安捷倫氣相檢測器有4種分別是FPD、NPD、ECD、FID、FPD、NPD檢測器主要檢測農藥殘留，故未考慮，經過試驗和查找相關資料，ECD檢測器對香蘭素、乙基香蘭素的響應值很低，基本不出峰，而FID檢測器對香蘭素、乙基香蘭素響應值很高，選擇檢測器溫度250℃、300℃、320℃和選擇進樣口溫度200℃、250℃、270℃進行多次試驗，發(fā)現檢測器溫度300℃和進樣口溫度270℃時三種物質峰形最好且分離效果最好。

本試驗主要考察了毛細管柱DB-FAAP（50m×0.32mm×0.50µm）、DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）、HP-1（25m×0.32mm×0.25μm）、HP-5（30m×0.25mm×0.25μm）、DB-1701（30m×0.32mm×0.25μm等毛細管柱的分離效果，尤其對DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）、DB-1（30m×0.25mm×0.25µm）、HP-1（25m×0.32mm×0.25μm）三種規(guī)格的毛細管柱進行多次實驗驗證，發(fā)現毛細管柱的膜厚對峰形有較大的影響，5.0µm膜厚的峰形更尖銳對稱且分離時間更短，結果表明選擇極性柱和中極柱時，三種組分基本不出峰或峰形很差，針對DB-1（15m×0.32mm×5.0µm）毛細管柱進行程序升溫和恒溫設置，以及不同柱流速下的出峰情況進行多次驗證，恒溫120℃、180℃、210℃、時間30min以及程序升溫90℃（2min）-10℃/min升至220℃（5min）等條件下和柱流速為0.5、1.0、1.5、2.0mL/min幾種情況下的標樣的色譜圖，發(fā)現恒溫條件下三種物質的分離不是太好，且需要較長時間，而程序升溫明顯提高色譜柱的分離度，當柱流速大于1.5mL/min，由于毛細柱為15m，溶液出峰時間過于靠前，峰形不太好，當柱流速小于0.5mL/min，就降低了工作效率，出峰時間過長，所以最終選擇色譜條件為1.2.1。

2.1.2 內標物的選擇

內標法與外標法相比，主要優(yōu)點是消減了儀器進樣過程中進樣體積的變化對檢測結果的影響，能提高分析結果的準確度，選擇實驗室常用的有機試劑乙腈、甲醇、已酸乙酯作為內標物，經過多次實驗，發(fā)現已酸乙酯為內標物最好，20µg/mL已酸乙酯時，峰面積為83.6；25µg/mL香蘭素峰面積為119.6；25µg/mL乙基香蘭素峰面積為107.8，而且三者的化學性質相似，三者互溶，已酸乙酯是米粉中不可能存在的物質，內標物已酸乙酯的量接近于被測組分香蘭素、乙基香蘭素，但不會發(fā)生化學反應，所以最終選擇已酸乙酯作為內標物。在1.2條件下25µg/mL香蘭素、乙基香蘭素混合內標液中，已酸乙酯的塔板數為128499，分離度為34.54，香蘭素的塔板數為268807，分離度為54.37，乙基香蘭素的塔板數為236058，分離度為8.63，三者完全分離且效果很好，能滿足標準規(guī)定的要求，三組分在20min內完成分離，分離效果最理想。

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