三氯蔗糖（Sucralose）是一種重要的食品添加劑，它可替代蔗糖有效改善食品的口味，適應(yīng)了人們對(duì)食品色香味的需求，同時(shí)由于其安全性可有效地避免糖所帶來(lái)的疾病可能性，是目前國(guó)際上技術(shù)含量最高的功能性甜味劑，是近年來(lái)全球食品添加劑市場(chǎng)增速最快的市場(chǎng)板塊，它一定程度上代表了一個(gè)國(guó)家甜味劑生產(chǎn)領(lǐng)域的科技水平。三氯蔗糖生產(chǎn)過(guò)程中影響其口味的原因主要是其副反應(yīng)產(chǎn)生的中間產(chǎn)物導(dǎo)致，此外三氯蔗糖的氯代基團(tuán)的位置不同其甜度也會(huì)有很大影響。有研究表明，蔗糖C-4、C-1′、C-4′、C-6′上任何位置被鹵素取代，所得蔗糖鹵代衍生物甜度都比蔗糖強(qiáng)，而C-6上的取代則可能導(dǎo)致甜味降低甚至產(chǎn)生苦味。而4，1′，6′-三氯蔗糖在相關(guān)性產(chǎn)物中的甜度最高，而且最容易得到；其次，其他副產(chǎn)物的存在會(huì)影響整體產(chǎn)品的甜度。本文建立了一種有效分析三氯蔗糖及其相關(guān)產(chǎn)物含量的檢測(cè)方法。

1 材料與設(shè)備

三氯蔗糖：純度≥99.5%，山東三和維信生物科技有限公司；甲醇：高效液相色譜用，天津市大茂化學(xué)試劑廠；ProntoSILKromaPlusC18：150×4.6mm，德國(guó)BISCHOFF；自動(dòng)進(jìn)樣器：SIL-16，島津儀器（蘇州）有限公司；高效液相色譜儀：EasySep-1020，上海通微分析技術(shù)有限公司；蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀：UM5800，無(wú)錫通微檢測(cè)技術(shù)有限責(zé)任公司；空氣泵：XWK-Ⅲ，天津市津分分析儀器制造有限公司；電子分析天平：FA1004B，上海佑科儀器儀表有限公司。

2 方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

2.1.1 配置不同濃度的三氯蔗糖樣品

稱取0.05g（精確至0.0001g）三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣品，加入50%甲醇-水溶液稀釋至20g（精確至0.0001g），分別稱量5g、2g、1g、0.5g、0.4g、0.2g、0.1g、0.05g（精確至0.0001g）的稀釋液并用甲醇-水溶液分別定容至10g、10g、10g、10g、20g、20g、20g、20g（精確至0.0001g），通過(guò)稱量比例計(jì)算9個(gè)三氯蔗糖樣品的準(zhǔn)確濃度。

2.1.2 梯度洗脫比例設(shè)定

流動(dòng)相使用甲醇（A）與水（B），根據(jù)甲醇與水對(duì)三氯蔗糖及其相關(guān)產(chǎn)物在流動(dòng)相中與固定相相互作用的極性不同，分別配置20%、30%、40%、80%的甲醇-水流動(dòng)相，利用三氯蔗糖生產(chǎn)過(guò)程中的成分混雜的結(jié)晶母液來(lái)觀察物質(zhì)分離情況制定適宜的梯度。

2.1.3 HPLC-ELSD檢測(cè)

連接高效液相色譜儀、蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀、空氣泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、C18色譜柱，設(shè)定柱溫箱溫度為35℃，霧化器溫度75℃，空氣流量2.5L/min，進(jìn)樣量20μL，流動(dòng)相比例按照2.1.2梯度洗脫比例設(shè)定，流動(dòng)相流量1mL/min。將2.1.1所配置的9個(gè)樣品濃度從低到高依次放入自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣時(shí)間設(shè)定35min，依次開(kāi)始檢測(cè)，得到相對(duì)應(yīng)的6.5min左右得到的三氯蔗糖的峰面積。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合

分別取不同三氯蔗糖樣品濃度及峰面積的對(duì)數(shù)，通過(guò)數(shù)據(jù)擬合得到y(tǒng)=kx+b的兩元一次方程，其中x為峰面積對(duì)數(shù)，y為濃度對(duì)數(shù)。

2.2 含量檢測(cè)

2.2.1 樣品配置

稱量0.1g（精確至0.0001g）三氯蔗糖樣品，記為m，用50%甲醇-水溶液定容至20g（精確至0.0001g），記為M，于自動(dòng)進(jìn)樣器中按照2.1.3方法檢測(cè)其相應(yīng)峰面積，記為A，其余雜質(zhì)也可按照此方法計(jì)算其含量。液體樣品也可按照此方法進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.2 含量計(jì)算

將以上峰面積代入公式（1）

式中：C—三氯蔗糖或其他相關(guān)物質(zhì)含量；

A—樣品峰面積；

m—稱量固體質(zhì)量；

M—定容樣品質(zhì)量。

2.3 物質(zhì)定性

使用C18反向色譜柱對(duì)各種物質(zhì)進(jìn)行分離。根據(jù)色譜柱分離原理，各種雜質(zhì)的出峰次序是根據(jù)物質(zhì)的極性強(qiáng)度，從高到低依次出峰。這一點(diǎn)也通過(guò)使用HPLC-MS液質(zhì)聯(lián)用的質(zhì)譜分析得到驗(yàn)證。一方面TOF-MS質(zhì)譜分析中，分子離子峰明確，可以確定物質(zhì)分子量；另一方面，通過(guò)氯元素同位素在自然界中的豐度，可以從質(zhì)譜譜圖中非常明確的確定物質(zhì)分子中含氯原子的個(gè)數(shù)。綜合這兩點(diǎn)，和實(shí)際反應(yīng)可能產(chǎn)生的各種衍生物，基本可以確定各個(gè)HPLC峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)的分子式。

3 結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

3.1.1 甲醇-水比例下高低極性物質(zhì)出峰情況

以圖1為例，三氯蔗糖結(jié)晶母液在不同濃度的甲醇溶液中各組分極性表現(xiàn)不同，可通過(guò)此情況設(shè)定梯度分離比例，將各組分分離的更加精確。

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