2.2.3流動(dòng)相的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)中31種添加劑性質(zhì)具有較大差異，對(duì)色譜條件要求極高。為了達(dá)到最佳的色譜分離，對(duì)乙腈-水、乙腈-乙酸銨水和甲醇-水3種流動(dòng)相體系進(jìn)行了考察。甲醇-水體系對(duì)于誘惑紅等著色劑，存在嚴(yán)重拖尾，峰形較寬和重疊峰等現(xiàn)象，對(duì)目標(biāo)化合物的定量存在干擾；當(dāng)選用乙腈-水時(shí)，大多數(shù)目標(biāo)化合物出峰時(shí)間提前，如糖精鈉、安賽蜜和檸檬黃的出峰在色譜柱沒(méi)有保留，同時(shí)會(huì)受樣品基質(zhì)效應(yīng)的干擾從而影響樣品的定量結(jié)果，在檢測(cè)過(guò)程中易受溶劑效應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng)的干擾，難以實(shí)現(xiàn)定性定量分析；當(dāng)選用乙腈-乙酸銨水體系，色譜分離度好，質(zhì)譜響應(yīng)度高，滿足實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分離的要求。

通過(guò)考察10mmol/L乙酸銨和20mmol/L乙酸銨兩種濃度對(duì)目標(biāo)化合物的影響，并綜合目標(biāo)物的電離、pKa值和加氫方法、色譜分離效果及鹽濃度等因素對(duì)質(zhì)譜儀器的影響，最后流動(dòng)相選擇乙腈-10mmol/L乙酸銨，能達(dá)到最佳分離效果。31種混合標(biāo)準(zhǔn)品（濃度為100ng/mL）的總離子流圖（totalionchromatogram，TIC）見(jiàn)圖3。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（matrixeffect，ME）是指檢測(cè)系統(tǒng)在分析樣品中分析物以外的組分，對(duì)分析物的分析過(guò)程有明顯的干擾，同時(shí)還會(huì)對(duì)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性有影響，這些干擾和影響通常被稱作基質(zhì)效應(yīng)?；|(zhì)抑制效應(yīng)主要是基質(zhì)在電離源霧化電離過(guò)程中對(duì)目標(biāo)物的霧化電離產(chǎn)生抑制。基質(zhì)效應(yīng)可用ME=B/A×100%計(jì)算，式中A為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，B為基質(zhì)曲線斜率。當(dāng)ME＜100%時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)是抑制作用；當(dāng)ME＞100%時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)是增強(qiáng)作用。本實(shí)驗(yàn)配制兩組標(biāo)準(zhǔn)曲線：曲線A是直接用70%甲醇將混合標(biāo)準(zhǔn)工作液稀釋為標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液；曲線B是用空白糕點(diǎn)樣品的提取液做為稀釋液，配成標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。由表4可知，在0.02～1μg/mL濃度范圍內(nèi)，兩種曲線的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.992。本實(shí)驗(yàn)大部分添加劑表現(xiàn)出基質(zhì)抑制效應(yīng)，山梨酸、苯甲酸、阿斯巴甜等14種添加劑表現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。一般認(rèn)為，基質(zhì)曲線響應(yīng)值與其標(biāo)準(zhǔn)曲線響應(yīng)值之比在85%～115%之間不存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)，依此方法可判定，色素類(lèi)受基質(zhì)抑制效應(yīng)明顯，如日落黃、亮藍(lán)、橙黃G、喹啉黃、隱性結(jié)晶紫、酸性紅G。為了消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液使用空白基質(zhì)提取液配制。

2.3.2加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

在陰性糕點(diǎn)樣品中添加31種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，添加水平分別為2.0、4.0、8.0mg/kg，每個(gè)水平的樣品測(cè)定3次，其平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見(jiàn)表4，各組份的平均回收率為71.3%～103.1%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.49%～7.62%，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性好。取最低添加水平2.0mg/kg，上機(jī)檢測(cè)，得到儀器信噪比（S/N），定量限計(jì)算公式如下，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4實(shí)際樣品的檢測(cè)

用所建立的方法對(duì)45件購(gòu)于超市的糕點(diǎn)樣品進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)測(cè)樣品中檢出山梨酸陽(yáng)性樣品2個(gè)，檢出值分別為334mg/kg、84mg/kg，同時(shí)與國(guó)標(biāo)方法GB5009.28—2016液相色譜法進(jìn)行對(duì)比，其結(jié)果分別為331mg/kg、82mg/kg；三氯蔗糖陽(yáng)性樣品1個(gè)，檢出值為78mg/kg，同時(shí)與國(guó)標(biāo)方法GB/T22255—2008食品中三氯蔗糖的測(cè)定方法進(jìn)行對(duì)比，其結(jié)果為77.2mg/kg，根據(jù)GB2760—2014的要求，對(duì)在糕點(diǎn)中使用添加劑的限量規(guī)定，本次實(shí)測(cè)樣品含量均低于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限量要求。

3結(jié)論

本研究建立了測(cè)定糕點(diǎn)中31種食品添加劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法?？瞻讟悠吩?.0、4.0、8.0mg/kg添加水平下的平均回收率在71.3%～103.1%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。該方法具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可對(duì)糕點(diǎn)樣品中的目標(biāo)物進(jìn)行定性定量分析，滿足食品添加劑的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。同時(shí)，本研究還建立了31種食品添加劑的質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)，為食品添加劑的快速篩查提供依據(jù)。

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