1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

選擇11款市售電子煙煙液樣品，其中Arabica-A和Arabica-B，Mallika-A和Mallika-B分別為同一香氣風格，除標示煙堿質(zhì)量分數(shù)外，配方組成一致。另外，選擇4款pH和香精組成（包括煙草、西瓜、薄荷、綠豆）不同、未添加煙堿的煙液配方。共15款煙液樣品具體信息見表1。

正己烷（色譜純，泰國RCI Labscan公司）；二氯甲烷（色譜純，美國Tedia有限公司）；丙二醇、甘油（USP級，國藥集團化學試劑有限公司）；去離子水（電阻率18.2 MΩ﹒cm）；乙酸、氫氧化鈉（AR，上海凌峰化學試劑有限公司）；正十七烷（≥98.5%，北京百靈威科技有限公司）；煙堿標準溶液（4 000 μg/mL異丙醇溶液，上海安譜科技有限公司）；水楊酸煙堿鹽、蘋果酸煙堿鹽（質(zhì)量分數(shù)為25%的水溶液）、酒石酸煙堿鹽（結(jié)晶體，質(zhì)量分數(shù)>99%）（自制）。

CPE205電子天平（感量0.000 01 g）、通用型pH計（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q50超純水儀（美國Millipore公司）；7890B氣相色譜儀（GC）、7890B/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS，美國Agilent公司）；Talboys多管式渦旋混合器（上海安譜科技有限公司）；RJ-TDL-40F低速多管式離心機（無錫瑞江分析儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 PG-VG體系樣品的制備

根據(jù)實驗要求，將丙二醇（Propylene glycol, PG）和甘油（Vegetable glycerin, VG）以一定比例混合，作為霧化溶劑。分別添加一定量的水楊酸煙堿鹽和蘋果酸煙堿鹽，配制一定煙堿濃度的PG-VG體系樣品。

1.2.2 中性水制備

取一定量的去離子水，煮沸20 min除去CO2，密封后冷卻至室溫。使用前以0.01 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2。每批次樣品處理均需重新制備。

1.2.3 pH測定

參考相關研究方法，稱取1.0 g煙液樣品，10 mL中性水稀釋，渦旋混合10 min，靜置20 min后，使用經(jīng)過校準的pH計測定樣品pH。

1.2.4 煙堿總量測定

參考CORESTA第62號推薦方法（CRM No. 62），稱取1.0 g電子煙煙液樣品，加入10 mL去離子水、5 mL 8 mol/L氫氧化鈉溶液和20 mL含正十七烷內(nèi)標的正己烷萃取液，渦旋振蕩60 min，離心分層，取有機相，采用GC法測定。分析條件：

色譜柱：DB-17毛細管柱（30 m´0.25 mm´0.25 µm）；升溫程序：170 ℃（10 min）；進樣口和FID檢測器溫度：270 ℃；進樣量：1.0 μL；分流比：10?1；載氣：氦氣（He）；載氣流量：1.5 mL/min；氫氣流量：30 mL/min；空氣流量：400 mL/min；尾吹氣（N2）流量：3 mL/min。

1.2.5 游離態(tài)與質(zhì)子態(tài)煙堿測定

分別取適量煙堿標準溶液和正十七烷內(nèi)標儲備液，用二氯甲烷稀釋定容，配制煙堿濃度分別為1.0、5.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL，且正十七烷內(nèi)標濃度為50.0 μg/mL的標準工作溶液。

準確稱取0.2 g左右電子煙煙液樣品，加入10 mL中性水、50 μL正十七烷內(nèi)標溶液和10 mL二氯甲烷，渦旋混合萃取30 min，2 500 r/min離心10 min，取有機相，GC-MS測定游離態(tài)煙堿質(zhì)量分數(shù)。

在水相溶液中加入1 mL 1.0 mol/L氫氧化鈉溶液使質(zhì)子態(tài)煙堿轉(zhuǎn)化為游離態(tài)，再加入50 μL正十七烷內(nèi)標溶液和10 mL二氯甲烷，渦旋混合萃取30 min，2 500 r/min離心10 min，取有機相。水相部分重復上述萃取過程進行二次萃取，取有機相。采用GC-MS法分別測定煙堿質(zhì)量分數(shù)，以兩次萃取液測定結(jié)果之和為質(zhì)子態(tài)煙堿質(zhì)量分數(shù)。

GC-MS條件：

色譜柱：HP-INNOWAX (30 m´0.25 mm´0.25 µm)；升溫程序：100 ℃（1 min）5℃/min180 ℃（5 min）30℃/min240 ℃（5 min）；進樣量：1.0 μL；分流比：50?1；載氣：氦氣，流量1.0 mL/min；進樣口和傳輸線溫度均為240 ℃；離子源溫度：230 ℃；選擇離子掃描（SIM）模式，煙堿定量離子為84(m/z)，定性離子為133、162(m/z)。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 26.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，使用Origin 9.5軟件作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 煙堿形態(tài)測定方法驗證

2.1.1 萃取試劑選擇

游離態(tài)煙堿易溶于有機相，而質(zhì)子態(tài)煙堿在水中的溶解性更強。液液兩相萃取法利用煙堿不同形態(tài)的這一特性，對游離態(tài)和質(zhì)子態(tài)煙堿進行兩相萃取。

考察3種常用于煙堿測定的萃取試劑（二氯甲烷、正己烷和甲苯），其均表現(xiàn)出了較好的疏水性特征，其中正己烷的疏水性能最佳，甲苯和二氯甲烷在20 ℃時有一定溶解性，二氯甲烷的水中溶解量為2%左右，對兩相萃取的影響較小。

進一步考察3種試劑對同一煙堿鹽型電子煙煙液的兩步萃取效率（圖2）。采用正己烷時第一次萃取不完全，在第二次萃取中煙堿響應較高，萃取效率不佳。甲苯中的煙堿響應值和單次萃取效率均較低。根據(jù)峰面積響應值計算，二氯甲烷中第二次萃取的煙堿響應值僅為第一次萃取的1.47%，單次萃取效率最高，疏水性和靈敏度良好，適用于不同形態(tài)和濃度范圍廣的煙堿萃取和分離。因此，選擇二氯甲烷作為萃取溶劑。

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