北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
將富集培養(yǎng)的泥樣梯度稀釋后，涂布于添加柚皮苷的篩選培養(yǎng)基，30℃倒置培養(yǎng)，每天觀察長(zhǎng)出的菌落形態(tài)及透明圈出現(xiàn)情況。挑取初篩出現(xiàn)透明圈的菌落，分離純化后挑取單菌落點(diǎn)樣至篩選平板。篩選平板分四塊區(qū)域點(diǎn)樣后放入30℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)，7d后獲得1株有明顯透明圈菌株，如圖1。將該菌株命名為DTC03。
觀察平板中的菌落形態(tài)，其菌落呈白色，不透明，邊緣不規(guī)則，表面粗糙的半球狀菌落(圖2a)。革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)菌株DTC03為長(zhǎng)桿狀的革蘭氏陽(yáng)性菌(圖2b)。芽孢染色表明該菌株DTC03可以產(chǎn)生芽孢(圖2c)。根據(jù)菌落形態(tài)，菌體形態(tài)，初步判定菌株DTC03屬于芽孢桿菌屬。
菌株DTC03明膠液化試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、葡萄糖、甘露醇試驗(yàn)均呈陽(yáng)性，甲基紅試驗(yàn)為陰性(表1)。
將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送到南京思普金生物科技有限公司測(cè)序，測(cè)得菌株DTC03的16SrDNA的序列為1392bp。將序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示該菌株DTC03的16SrDNA序列與貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)的16SrDNA序列相似度達(dá)99.93%。選擇與其親緣關(guān)系較近的菌株進(jìn)行比對(duì)，并使用MEGA7構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果如圖3所示，該菌是芽孢菌屬，且與Bacillusvelezensis同源相似性最高。結(jié)合形態(tài)和生理生化特征，將鑒定菌株DTC03為Bacillusvelezensis。目前國(guó)內(nèi)外尚未有Bacillusvelezensis產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶的相關(guān)報(bào)道。
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α-L-鼠李糖苷酶廣泛應(yīng)用于食品加工、醫(yī)藥及醫(yī)藥前體的制備。研究從海洋樣品中篩選產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶的細(xì)菌，對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，并對(duì)α-L-鼠李糖苷酶粗酶性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)透明圈平板篩選法從海州灣海域海泥樣品中篩選獲得一株產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶的細(xì)菌菌株DTCO3。通過(guò)形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性，以及16SrDNA序列的擴(kuò)增與分析，將菌株DTCO3鑒定為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillusvelezensis)。對(duì)菌株DTCO3α-L-鼠李糖苷酶粗酶液酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，該酶最適催化溫度和pH分別為40℃和p
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