2.3EPI數(shù)據(jù)庫的建立

將獲得的30種化合物增強型二級碎片離子（EPI）質(zhì)譜圖，與數(shù)據(jù)處理軟件Analyst相連接，導入每種化合物的EPI圖譜并編輯相應的化合物名稱、CAS登記號、碎片離子信息（精確質(zhì)量、化學式）等信息，形成30種目標化合物的EPT數(shù)據(jù)庫，信息詳見表2。此數(shù)據(jù)庫中每種目標化合物都有低、中、高三種能量疊加形成的EPI質(zhì)譜圖，該質(zhì)譜圖中二級碎片離子的響應為三種能量下響應的平均值，因此準確性更高。EPI質(zhì)譜圖碎片信息豐富，實現(xiàn)了無需標準品對照，也可對樣品中是否含有30種違禁添加藥品進行搜庫篩查，全面確證。

2.4方法檢出限、定量限、線性關系及基質(zhì)效應考察結(jié)果

分別用空白片劑、顆粒劑和膠囊將片劑、顆粒劑和膠囊（內(nèi)容物）樣品細致研磨，得到均質(zhì)樣品后稱量，稱取0.1000g左右樣品于100mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲提取30min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾，取濾液待測。若陽性樣品濃度超出線性范圍則用甲醇按一定比例稀釋后再測。

制作空白基質(zhì)溶液，將混合標準溶液單個標準品儲備液的配制：將30種違禁添加藥物分別稱取約10mg，置于10mL容量瓶中，11種那非類標準品中加入一定量的乙腈超聲溶解后定容，其余標準品加入一定量甲醇超聲溶解后定容，均配制成濃度約為1mg/mL的標準品儲備液，并保存于-4℃冰箱中。

色譜柱：PhenomenexKjneLex-C18色譜柱，規(guī)格50mm×2.1mm，2.6μm；柱溫：40℃；流動相：A為乙腈，B為10mmol/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫：0～7min，10％A～90％A，7～8min，90％A，8～8.1min，90％A～10％A，8.1～10min，10％A；流速：250μL/min；進樣量：1μL。離子源：TurboV電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正、負離子同時掃描，定時多反應監(jiān)測→信息依賴性獲取→增強型子離子掃描（ScheduledMRM→TDA→EP）；掃描范圍：50～650Da；氣簾氣（CUR）：30psi；碰撞氣（CAD）：High；噴霧電壓（IS）：5500V/-4500V；離子源溫度：550℃；霧化氣（GASl）：55psi；輔助氣（GAS2）：55psi。

獲得各化合物的信噪比（S/N），以3倍S/N和10倍S/N對應的濃度來確定30種化合物的檢m限（LOD）和定量限（LOQ）。分別用甲醇和三種空白基質(zhì)溶液來稀釋混合標準溶液。單個標準品儲備液的配制：將30種違禁添加藥物分別稱取約10mg，置于10mL容量瓶中，11種那非類標準品中加入一定量的乙腈超聲溶解后定容，其余標準品加入一定量甲醇超聲溶解后定容，均配制成濃度約為1mg/mL的標準品儲備液，并保存于-4℃冰箱中。

分別精確吸取30種標準品儲備液適量于一個100mL容量瓶中，用甲醇稀釋混勻后定容。使?jié)舛葹?～10μg/mL的混合標準品溶液，待使用時進一步稀釋。配制成5個梯度濃度的混合標準曲線工作溶液，共四組。以各日標化合物的峰面積（Y）和對應的濃度（X）進行線性擬合，得到線性方程、相關系數(shù)及標準曲線斜率，結(jié)果見表3。

采用相對響應值法比較，計算出30種化合物在三種基質(zhì)中的基質(zhì)效應，結(jié)果見表3。實驗表明，30種目標化合物在其線性范同內(nèi)，線性關系均良好，決定系數(shù)（R2）均大于0.996?；|(zhì)效應為0.87～1.04，結(jié)果詳見表4，因此三種空白基質(zhì)標準溶液和甲醇標準溶液的同歸方程斜率偏差為-4％～13％，均在標準曲線斜率的±20％范圍內(nèi)，EPI無差異，可忽略基質(zhì)效應的影響。

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