1、水：水是反相高效液相色譜法最重要的溶劑，它也是最難純化和保持其特性的流動(dòng)相之一。特別是在痕量分析檢測器處于高靈敏度狀態(tài)時(shí)，水的純度（理論上水電阻率約為18.2MΩ·cm）至關(guān)重要。長時(shí)間使用純度滿足不了要求的水，有時(shí)會(huì)出鬼峰、怪峰。水的純化可以采用蒸餾、離子交換、超純水制備系統(tǒng)等方法。水中有機(jī)物可以用高錳酸鉀或通過一根C₁₈柱去除。電蒸餾水或去離子水必須至少在全玻璃系統(tǒng)下重蒸餾一次，過濾、脫氣后才能上機(jī)使用。在使用電化學(xué)檢測器或其他高靈敏度檢測器時(shí)，二次蒸餾設(shè)備需要采用全石英玻璃系統(tǒng)。水中容易滋生微生物，一定要用新鮮的，最好每天換水，夏季更換時(shí)間最長也不要超過3d。

可以采用下列程序檢驗(yàn)水的純度：首先泵100mL水通過C₁₈柱，然后跑一個(gè)線性梯度洗脫，流速為1mL／min，10min流動(dòng)相甲醇從0升到100％，保持15min，通過在線紫外檢測器測定。要求在0.08AUFS擋位基線漂移小于10％，幾乎不出峰，即使出峰其峰高也小于滿刻度值的3％～5％。

2、乙腈：乙腈為反相高效液相色譜常用的溶劑，實(shí)驗(yàn)室常用的只能滿足紫外檢測器的需要。有時(shí)很難符合熒光檢測器和電化學(xué)檢測器的要求。

3、甲醇：甲醇是反相高效液相色譜常用的溶劑之一，其雜質(zhì)主要是水。它的主要問題也是有些特性滿足不了熒光檢測分析和電化學(xué)檢測分析要求。

4、氯代烴類溶劑：在正相高效液相色譜中常用的二氯甲烷等氯代烴類溶劑中，添加穩(wěn)定劑甲醇或乙醇。乙醇能夠提高流動(dòng)相的極性，縮短正相高效液相色譜分析中各組分的保留時(shí)間。各批次之間濃度的變化也許會(huì)影響重復(fù)性。國內(nèi)市場上可能不容易買到不含穩(wěn)定劑的氯代烴類溶劑，但是可以用氧化鋁柱吸附的辦法或者用水提取脫掉。不含穩(wěn)定劑的氯代烴類溶劑會(huì)緩慢分解，特別是與其他溶劑共存時(shí)。分解生成的鹽酸會(huì)腐蝕不銹鋼部件。以戊烯為穩(wěn)定劑的氯代烴類溶劑可避免產(chǎn)生上述問題。

5、醚類溶劑：這類溶劑中常添加穩(wěn)定劑防止其氧化，如四氫呋喃中加有對(duì)苯二酚。這種穩(wěn)定劑有紫外吸收，干擾紫外檢測?？梢栽谡麴s中加入氫氧化鉀去除。另外，這類溶劑中的氧化物可用氧化鋁柱吸附凈化。

（二）固定相

固定相亦稱填料。液固吸附色譜法色譜柱中的填料就是以硅膠為主的吸附劑。液液分配色譜法色譜柱中的填料則是以超純硅膠或雜化顆粒等為載體，載體表面上鍵合固定液。液相色譜固定相按化學(xué)組成分類可分為微粒硅膠、高分子微球、微粒多孔炭等主要類型；按結(jié)構(gòu)和形狀分為薄殼型和全孔型，無定型和球型；按填料表面改性與否可分為吸附型和化學(xué)鍵合型；也可以按洗脫模式分為吸附、液液分配、離子交換和凝膠滲透4類。在高效液相色譜填料的發(fā)展過程中曾使用過大顆粒全多孔硅膠，表面多孔硅膠即薄殼型填料（φ30μm）、小顆粒全多孔硅膠（φ3～10μm）。現(xiàn)在廣泛采用的是人工合成的超純小顆粒全多孔硅膠和雜化顆粒硅膠材料。顆粒度變化趨勢(shì)見。

對(duì)載體的要求是孔容大（＞1mL／g），比表面積大（＞200mz／g），孔徑為8～15nm。

一般認(rèn)為，硅醇基官能團(tuán)本身具有不同程度的酸性。微酸性的硅醇基團(tuán)在分離中起重要作用，而硅氧烷鍵只有很少影響或沒有影響。在相鄰硅原子上的酸性最強(qiáng)的羥基由于形成分子內(nèi)氫鍵而常常引起如化學(xué)吸附、色譜峰拖尾的效應(yīng)。為了減輕這一影響，通常采用化學(xué)鍵合固定相。雜化顆粒是在超純硅膠的基礎(chǔ)上，引入硅碳。它雖然解決了一些問題，但耐堿、耐高壓性能差。但在硅膠顆粒中引入亞乙基橋（bridgedethylenehybrid，BEH），較好地解決了上述問題，實(shí)現(xiàn)寬pH范圍下超高效快速分離。表面帶電雜化顆粒（chargedsurfacehybrid，CSH）是指顆粒表面帶有低水平的正電荷，可在低離子強(qiáng)度流動(dòng)相條件下提高樣品載量和峰對(duì)稱性，同時(shí)仍維持亞乙基橋鍵顆粒技術(shù)固有的機(jī)械穩(wěn)定性與化學(xué)穩(wěn)定性。