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鼠傷寒沙門(mén)氏菌基因組DNA
  • 鼠傷寒沙門(mén)氏菌基因組DNA-偉業(yè)計(jì)量

鼠傷寒沙門(mén)氏菌基因組DNA

Genomic DNA from Salmonella typhimurium
  • ¥800
  • 編號(hào):BNCC369960
  • 形式:凍干粉;5μg/支
  • 交付:當(dāng)天
  • 品牌:BNCC
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傳代方法 使用前請(qǐng)先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽; 1.取細(xì)菌培養(yǎng)液1-5ml,10,000rpm(11,500×g)離心1min,盡量吸凈上清; 2.向菌體沉淀中加入200μL緩沖液GA,振蕩至菌體徹底懸浮。注意:對(duì)于較難破壁的革蘭氏陽(yáng)性菌,可略過(guò)第2步驟,加入溶菌酶溶液進(jìn)行破壁處理,具體方法為:加入110μL緩沖液(20mM Tris,pH8.0;2mM Na2-EDTA;1.2%Triton),和70μL溶菌酶溶液(50mg/mL,客戶(hù)自備,目錄號(hào):RT401),37℃處理30min以上。如果需要去除RNA,可加入4μL RNase A(100mg/mL)溶液(客戶(hù)自備,目錄號(hào):RT405-12),振蕩15sec,室溫放置5min; 3.向管中加入20μL Proteinase K溶液,混勻; 4.加入220μL緩沖液GB,振蕩15sec,70℃放置10min,溶液應(yīng)變清亮,簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意:加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀,一般70℃放置時(shí)會(huì)消失,不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說(shuō)明細(xì)胞裂解不徹底,可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純; 5.加220μL無(wú)水乙醇,充分振蕩混勻15sec,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠; 6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm(13,400×g)離心30sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中; 7.向吸附柱CB3中加入500μL緩沖液GD(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000rpm(13,400×g)離心30sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中; 8.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000rpm(13,400×g)離心30sec,倒掉廢液,吸附柱CB3放入收集管中; 9.重復(fù)操作步驟8; 10.將吸附柱CB3放回收集管中,12,000rpm(13,400×g)離心2min,倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn); 11.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μL洗脫緩沖液TE,室溫放置2-5min,12,000rpm(13,400×g)離心2min,將溶液收集到離心管中。注意:洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μL,體積過(guò)小影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi),pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率;且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。為增加基因組DNA的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室溫放置2min,12,000rpm(13,400×g)離心2min;
存儲(chǔ)條件 2-8℃
安全等級(jí) 1
共享方式 公益性共享
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