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  • ¥500
  • 編號:BNCC354996
  • 形式:質(zhì)粒干粉
  • 交付:當天
  • 品牌:BNCC
  • 用途:
    pTrc99a 載體是一種緊密調(diào)控的tac啟動子載體,可用于在大腸桿菌中表達融合和非融合蛋白。該載 體可與pET系統(tǒng)的原核表達載體互補,啟動強度稍弱,但更易于表達出活性蛋白,減少形成包涵體的概 率。
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基本信息 相關(guān)資源
培養(yǎng)基 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃)
傳代方法 1.溶解: 收到質(zhì)粒干粉后,請加入 20μl 無菌水至管底,溶解質(zhì)粒,室溫靜置 1min; 2.混合(吸附質(zhì)粒): 200μl 感受態(tài)細胞 + 質(zhì)粒 DNA 5~10µl 混勻,冰上放置 30min; 3.熱激導入: 42℃靜置 90s; 4.收縮膜孔: 冰浴 2min; 5.修復培養(yǎng): 毎管加 800µl LB 液體培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng) 1h 150 r/min; 6.篩選培養(yǎng): 將適當體積(100 µl)的復蘇細胞,涂布在相應(yīng)抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min(瓊脂面務(wù)必干燥后), 倒置培養(yǎng) 12-16h,出現(xiàn)菌落。 7.提?。? 挑取單克隆菌落至相應(yīng)抗性 LB 液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng) 12-16h,根據(jù)試驗需要提取質(zhì)粒。
生長條件 LB +氨芐青霉素,37℃(克隆菌株DH5α,6849bp ,啟動子:Trc 復制子:PBR322 終止子:rrnB T2 )
存儲條件 2-8℃
安全等級 1
應(yīng)用領(lǐng)域 pTrc99a 載體是一種緊密調(diào)控的tac啟動子載體,可用于在大腸桿菌中表達融合和非融合蛋白。該載 體可與pET系統(tǒng)的原核表達載體互補,啟動強度稍弱,但更易于表達出活性蛋白,減少形成包涵體的概 率。
共享方式 公益性共享
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