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  • ¥700
  • 編號(hào):BNCC354583
  • 形式:質(zhì)粒干粉
  • 交付:當(dāng)天
  • 品牌:BNCC
  • 用途:
    哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行海腎螢光素酶(Renilla luciferase)報(bào)告基因檢測的質(zhì)粒,主要用于在其多克隆位點(diǎn)插入感興趣的5’-UTR、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等調(diào)控元件研究該調(diào)控序列的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性,或用作螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報(bào)告基因檢測時(shí)的內(nèi)參,從而消除因?yàn)橘|(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率不同而帶來的誤差。
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培養(yǎng)基 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃)
傳代方法 1.溶解: 收到質(zhì)粒干粉后,請加入 20μl 無菌水至管底,溶解質(zhì)粒,室溫靜置 1min; 2.混合(吸附質(zhì)粒): 200μl 感受態(tài)細(xì)胞 + 質(zhì)粒 DNA 5~10µl 混勻,冰上放置 30min; 3.熱激導(dǎo)入: 42℃靜置 90s; 4.收縮膜孔: 冰浴 2min; 5.修復(fù)培養(yǎng): 毎管加 800µl LB 液體培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng) 1h 150 r/min; 6.篩選培養(yǎng): 將適當(dāng)體積(100 µl)的復(fù)蘇細(xì)胞,涂布在相應(yīng)抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min(瓊脂面務(wù)必干燥后), 倒置培養(yǎng) 12-16h,出現(xiàn)菌落。 7.提?。? 挑取單克隆菌落至相應(yīng)抗性 LB 液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng) 12-16h,根據(jù)試驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。
生長條件 LB +氨芐青霉素,37℃(克隆菌株DH5a,4045bp)
存儲(chǔ)條件 2-8℃
安全等級(jí) 0
應(yīng)用領(lǐng)域 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行海腎螢光素酶(Renilla luciferase)報(bào)告基因檢測的質(zhì)粒,主要用于在其多克隆位點(diǎn)插入感興趣的5’-UTR、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等調(diào)控元件研究該調(diào)控序列的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性,或用作螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報(bào)告基因檢測時(shí)的內(nèi)參,從而消除因?yàn)橘|(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率不同而帶來的誤差。
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