免疫原性是指藥物刺激機體形成特異性抗體或致敏淋巴細胞的性質(zhì)，在生物技術(shù)藥物研發(fā)中，進行免疫原性檢測是一項重要工作。對于病人來說，免疫原性會影響藥物的安全和有效性，甚至?xí)驗榭顾幙贵w和內(nèi)源蛋白交叉給病人帶來生命危險，而對于企業(yè)來說免疫原性檢測不好，倘若到了臨床才發(fā)現(xiàn)抗藥抗體問題，會增加企業(yè)研發(fā)風(fēng)險和損失。那么常用的免疫原性檢測方法有哪些呢？

1、ELISA-橋法

對抗體藥物進行免疫原性檢測是生物技術(shù)藥物申請臨床試驗和注冊的重要內(nèi)容，盡管已有的動物試驗顯示免疫原性不一定會在人體內(nèi)產(chǎn)生預(yù)期的免疫反應(yīng)，但對藥物免疫反應(yīng)的評價仍顯得十分重要。將抗原或抗體固定的過程稱為包被，換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。ELISA-橋法包被藥物，用標記的藥物檢測。此法的優(yōu)點是能檢測各類抗體亞型，無種屬特異性，可高通量檢測，缺點是不易檢測到低親和力的抗體，包被或標記時可能會掩蓋或改變藥物的抗原表位，易受藥物本身的干擾。美迪西提供免疫原性檢測服務(wù)，主要使用小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、非人靈長類動物做免疫原性毒性試驗。

2、ELISA-直接法

抗體的包被一般均采用直接吸附法，蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。ELISA-直接法包被藥物，用標記抗體檢測。ELISA-直接法用于免疫原性檢測的優(yōu)點是可能會增加檢測低親和力抗體的能力，且高通量。然而當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法。而且直接包被時可能會掩蓋或改變藥物的表位，僅檢測單一亞型，有種屬特異性，多次洗滌時丟失低親和力抗體，參考品與樣本之間試劑可能不同。

3、ELISA-間接法

ELISA-間接法包被單抗或生物素，再加藥物，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。

4、放射免疫分析法（RIA）

RIA 是一種微量分析法，就是利用放射性核素標記抗原或抗體，然后與被測的抗體或抗原結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物的原理來進行分析的。它兼有放射性同位素的靈敏性和抗原、抗體反應(yīng)的特異性兩大特點。該法還具有準確性高和精密度好，便于標準化以及操作簡便、經(jīng)濟等優(yōu)點。由于RIA具有靈敏度高、特異性強、測量簡單和成本低等優(yōu)點，RIA在應(yīng)用方面具有一定的生命力。但是，又因為它最致命的弱點就是使用放射性核素，此外標記物有效使用時間短，難以實現(xiàn)操作和測量的自動化等，它的進一步發(fā)展受到一些局限?，F(xiàn)在免疫分析技術(shù)都在朝著非同位素標記免疫分析的方向發(fā)展。

5、電化學(xué)發(fā)光法（ECL）

電化學(xué)發(fā)光法（ECL）源于電化學(xué)法和化學(xué)發(fā)光法，不僅可以應(yīng)用于所有的免疫測定，而且還可用于DNA／RNA探針檢測。它的優(yōu)點是液相法，可檢測各種抗體亞型，無種屬特異性、高通量，可使用高濃度基質(zhì)，檢測表面積大和信號穩(wěn)定。缺點是需制備2種標記物（生物素和TAG），標記物分子的表位可能會變化或標記過程會改變分子，所用試劑通用性差。

6、表面等離子體共振

表面等離子體共振法的優(yōu)點是液相法，不需結(jié)合物（酶標記抗體），能檢測到不同親和力的抗體和各亞型抗體，無種屬特異性。缺點是化學(xué)連接可能會影響分子，與葡聚糖連接影響表位的暴露，復(fù)性可能會使分子降解，所用試劑通用性差，低通量，如果產(chǎn)生的抗體是藥物同種亞型的抗體，要證實一種人源化抗體的抗抗體反應(yīng)比較困難，靈敏度低。

7、酶聯(lián)免疫斑點法（ELISpot）

酶聯(lián)免疫斑點法（ELISpot）的原理與ELISA類似，也是檢測細胞產(chǎn)生的細胞因子或其他可溶性蛋白的方法，它不僅能測定細胞因子量，還可通過計數(shù)檢測分泌此細胞因子的細胞頻率，靈敏度高于ELISA，而且實驗采用的捕獲抗體不會影響活化細胞分泌細胞因子。缺點是比ELISA技術(shù)復(fù)雜而費時，需嚴密控制實驗條件，操作人員需技術(shù)熟練，并能對實驗結(jié)果進行分析，以減少實驗偏差；屬半定量方法。

8、免疫PCR法（IPCR）

免疫PCR法（IPCR）是在ELISA的基礎(chǔ)上建立起來的，用PCR擴增代替ELISA的酶催化底物顯色。PCR具有很強的放大能力，可以定量地檢測DNA和RNA，具有非常高的靈敏度和特異性，因此，將與抗原結(jié)合的特異抗體通過連接分子與DNA結(jié)合，再經(jīng)PCR擴增定量檢測抗原使得IPCR的靈敏性高于ELISA。與對應(yīng)的ELISA比較，IPCR至少可使抗體檢測的靈敏度提高1000倍，而且該法中僅僅采用稀釋的方法就可以消除生物樣品中基質(zhì)的干擾。

目前報道的IPCR均采用待檢抗原直接吸附固相，因此固相的均質(zhì)性對結(jié)果有很大的影響；同時檢測的樣品中其他成分也可以吸附固相，極易產(chǎn)生背景過高或精確度下降。有些難于吸附固相的抗原也就不能用免疫PCR檢測，連接分子的特異性和均質(zhì)性對PCR影響很大，PCR擴增過程相對簡單，如用微量板作為固相需選用配套的PCR儀，否則需將其移入反應(yīng)管內(nèi)，這必然導(dǎo)致很大的誤差，經(jīng)放大可產(chǎn)生顯著差異。IPCR具有廣泛的應(yīng)用前景，但有必要進一步完善IPCR的實驗過程和配套試劑的研制。

抗體類藥物免疫原性檢測不僅僅是藥物治療效果的問題，更是藥物安全性的問題，人們對抗抗體的副作用目前仍不明確。但抗抗體產(chǎn)生對藥物本身的影響以及潛在的過敏反應(yīng)不容忽視，因此對抗體類藥物免疫原性檢測的工作需要不斷研究。

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