磷脂酸(簡稱為PA)是一種二?；视土字彩羌?xì)胞膜的組成成分之一，PA分子內(nèi)含有甘油骨架，其中sn-1和srt-2羥基被脂肪酸酯化，St／-3位被磷酸基團(tuán)取代。研究發(fā)現(xiàn)PA具有促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、引起肌肉收縮、促進(jìn)激素分泌等生物學(xué)功能，在食品、藥品和化妝品等多個(gè)領(lǐng)域具有重要的應(yīng)有價(jià)值。大豆磷脂富含PA成分，含量約為5％～15％，是制備PA的主要商業(yè)來源。目前PA的制備方法主要有三種，即溶劑法、酶法與化學(xué)合成法。陶銀華等使用乙醇與甲醇依次萃取大豆粉末磷脂，之后使用體積比為1:4的正己烷-甲醇進(jìn)行液液萃取，經(jīng)鋅離子處理得到含量為98％的PA產(chǎn)品，回收率較低，為10％。TsutomuNishide等通過磷脂酶D水解磷脂酰膽堿制備PA，可得含量80％以上PA產(chǎn)品，但磷脂酶D較為昂貴。陳福明等使用化學(xué)合成的方法，以雙硬脂酸甘油脂為原料，與五氧化二磷反應(yīng)后得到粗磷脂酸，溶于低碳醇、酮、石油醚等溶劑后重結(jié)晶純化，干燥后可得含磷量在3.5％以上的磷脂酸產(chǎn)品，該法反應(yīng)條件要求較高，工藝復(fù)雜。

本文用酸性乙醇提取脫糖磷脂中的PA，提取液經(jīng)冷凍沉淀后，通過調(diào)節(jié)pH得到PA產(chǎn)品。該方法具有工藝簡單的特點(diǎn)，易于規(guī)?；苽銹A。

一、材料與方法

1、原料與試劑

大豆粉末磷脂(SPO)，江蘇省曼氏生物科技有限公司；脫糖大豆粉末磷脂，實(shí)驗(yàn)室自制；正己烷、無水乙醇、氨水、鹽酸，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；正己烷、異丙醇，色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；PA標(biāo)準(zhǔn)品，美國sigma公司。

2、儀器與設(shè)備

EL204-IC電子分析天平：MettlerToledo儀器有限公司；RE-52A型真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；SHZ-D(III)水循環(huán)式真空泵：鞏義市予華儀器有限公司；Waters1525高效液相色譜儀(蒸發(fā)光檢測器)：美國沃特世公司；HH-4恒溫水浴鍋：常州市金壇區(qū)環(huán)宇科學(xué)儀器廠；DKZ系列電熱控溫振蕩水浴鍋：常州金壇精達(dá)設(shè)備有限公司；KH5200DE型超聲清洗器：上海冠特超聲儀器有限公司；ZK-072型真空烘箱：上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠。

3、實(shí)驗(yàn)方法

（1）PA提取實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取脫糖磷脂10.00g于500mL錐形瓶中，按一定料液比加入一定酸醇比的酸性乙醇(V25％HCI:V無水乙醇來表示酸醇比)，升溫到一定溫度攪拌一定時(shí)間后，過濾。將酸提液在-20℃下冷凍4h時(shí)間，濾去沉淀后，使用氨水調(diào)清液pH至沉淀析出，取沉淀溶于一定量正己烷中，充分?jǐn)嚢韬鬄V去不溶物，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫溶后得PA產(chǎn)品。

（2）HPLC分析

樣品配置：用流動(dòng)相溶解得到濃度為3mg／mL的樣品溶液，經(jīng)0.221μm膜過濾，采用外標(biāo)法進(jìn)行HPLC檢測。

HPLC條件：色譜柱：Si-60(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫：30℃。檢測器：蒸發(fā)光檢測器，漂移管溫度：55℃。進(jìn)樣量：10μL。流動(dòng)相為正己烷：異丙醇：1％乙酸(8:8:1，v／V／V)，流速：1.0mL／min。

PA標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：準(zhǔn)確稱取10.0mg質(zhì)量的PA于5mL容量瓶中，使用流動(dòng)相溶解并定容。取上述溶液分別稀釋為0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（3）回收率的計(jì)算

PA回收率的計(jì)算見下式：

二、結(jié)果與分析

1、PA含量的測定

標(biāo)準(zhǔn)樣品、原料和產(chǎn)品的HPLC圖見圖1、圖2和圖3，由圖1可見PA的保留時(shí)間為7.6min，圖2、圖3中保留時(shí)間為7.6min的峰為PA。

以PA含量為橫坐標(biāo)，積分面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，濃度范圍為0.2～2.0mg／mL，回歸方程為Y=6704241.57x-181158.33，R2=0.998，結(jié)果表明，PA在濃度范圍為0.2～2.0mg／mL之間呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。

分析原料中的PA含量為9.3％。
 

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