北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
紅參,五加科植物,其性溫、味甘、香味較濃。紅參相比于人參組織更加致密,更利于保存。紅參,是一種既可食用,又可藥用的植物,具有廣泛的應(yīng)用和開發(fā)前景。紅參中主要活性成分為皂苷和多糖。長期以來,對紅參的研究一般都集中在人參皂苷上,忽略了紅參多糖活性成分的功效。關(guān)于紅參多糖的研究集中在提取條件的優(yōu)化以及生物活性方面,研究表明,紅參多糖具有抗腫瘤、抗氧化、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂和血糖、抗炎等作用。目前,對于紅參多糖的體內(nèi)抗氧化能力研究較少。人與外界持續(xù)接觸,包括呼吸,外界污染,放射線照射等因素,在人體內(nèi)產(chǎn)生自由基。研究表明,癌癥、衰老等其他疾病與過量的自由基的產(chǎn)生有關(guān)聯(lián)??寡趸到y(tǒng)是可與免疫系統(tǒng)比擬的,具有完善和復(fù)雜功能的系統(tǒng),抗氧化能力越強(qiáng),人體越健康。此次實(shí)驗(yàn)以紅參多糖(redginsengpolysaccharidesRGPs)為研究對象,通過比較正常對照組小鼠與RGPs低、中、高劑量組小鼠臟器系數(shù),血清和肝、腎、脾組織中MDA含量、SOD和GSH-Px活力,研究RGPs對小鼠的體內(nèi)抗氧化活性,為RGPs今后的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。
一、材料與方法
1、材料與試劑
紅參:購自吉林省長白縣。
RGPs制備方法:紅參粉末,加入適量蒸餾水,超聲提取。離心(4000r/min,10min),取上清,sevag法脫蛋白,然后濃縮,透析溶液,80%乙醇醇沉靜置,過濾離心后干燥得紅參多糖。采用苯酚-硫酸法,測得RGPs的多糖含量為67.83%。
普通昆明小鼠(體重量20~35g),購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);無水乙醇、正丁醇、三氯甲烷、冰醋酸等(分析純),蛋白定量、丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶測定試劑盒,南京建成生物工程研究所。
2、儀器與設(shè)備
電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司型號:E-10D),恒溫水浴鍋(上海申勝生物技術(shù)有限公司型號:W202B),紫外分光光度計(jì)(美國Varian公司型號:Cary100),小型高速冷凍離心機(jī)(Saitexingyi離心機(jī)儀器有限公司型號:TGL-16M),小型高速常溫離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號:TDL-80-2C),酶標(biāo)儀(美國伯樂),旋渦混勻器(上海梅香儀器有限公司型號:ZW-A),組織勻漿機(jī)(寧波新芝科器研究所型號:DY89-I),電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(昆山一恒儀器有限公司型號:DHP-9012)。
3、方法
(1)動物分組及劑量
小鼠適應(yīng)喂養(yǎng)后隨機(jī)分為4組:正常對照組(0.9%生理鹽水,0.2mL/d)、RGPs低劑量組(100mg/kg,0.2mL/d)、RGPs中劑量組(200mg/kg,0.2mL/d)、RGPs高劑量組(400mg/kg,0.2mL/d)。每組8只,連續(xù)灌胃30d,自由攝食飲水。
(2)指標(biāo)測定
小鼠禁食24h,取眼球血,離心(4℃,3000r/min,離心10min),取上清液,待測。處死小鼠,解剖取肝、腎、脾用冷生理鹽水漂洗,濾紙擦拭干凈,稱重。計(jì)算臟器指數(shù)。肝、腎、脾分別用生理鹽制備成10%勻漿,保存于-20℃待測。按照試劑盒說明測定血清和肝、腎、脾組織中MDA含量、SOD和GSH-Px活力。
臟器指數(shù)(mg/g)=器官質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量
(3)數(shù)據(jù)處理
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件處理,用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示結(jié)果,P<0.05為顯著差異。
二、結(jié)果與分析
1、RGPs對小鼠肝、腎、脾指數(shù)的影響
實(shí)驗(yàn)可以通過臟器指數(shù)一定程度上反映灌胃RGPs后對小鼠器官的影響,進(jìn)而初步分析RGPs的毒副安全性。由表1可知,連續(xù)灌胃30天后,與正常對照組相比,RGPs對小鼠肝指數(shù)、腎指數(shù)和脾指數(shù)均沒有顯著性差異(P>0.05),說明灌胃RGPs不影響小鼠的肝臟、腎和脾。
3、RGPs對小鼠血清及各組織MDA含量的影響
MDA是膜脂過氧化過程中最重要的產(chǎn)物之一,可通過測定MDA的含量,了解膜脂過氧化和膜系統(tǒng)受損程度。從表2可以看出,與正常對照組相比,RGPs3個劑量組均可降低血清和各組織中MDA的含量,其中RGPs高劑量組對血清和肝、腎、脾中MDA的含量分別降低了12.8%、40.23%、45.63%和39.34%。紅參多糖3個劑量組連續(xù)灌胃小鼠30天后,RGPs低劑量組可降低血清和肝組織MDA含量,但無顯著差異,對其他組織中MDA含量的降低具有差異顯著性。RGPs中、高劑量組均能顯著降低血清和各組織中MDA的含量。RGPs不同劑量組對降低腎組織中的MDA含量無顯著差異。這可能是RGPs具有穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),抑制了脂質(zhì)進(jìn)行過氧化反應(yīng)。表明RGPs能夠穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),抑制小鼠體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化過程,從而減輕自由基對機(jī)體損傷的程度。
2、RGPs對小鼠血清及各組織SOD活力的影響
SOD是機(jī)體內(nèi)天然存在的超氧自由基清除因子,它可以把有害的超氧自由基轉(zhuǎn)為過氧化氫,然后過氧化氫酶和過氧化物酶將其完全分解為無害的水,因此SOD在細(xì)胞免受氧化損傷的過程中起了重要作用。從表3可以看出,RGPs3個劑量組均可提高血清和各組織中SOD的活性,并呈現(xiàn)劑量關(guān)系,其中RGPs高劑量組對血清和肝、腎、脾中SOD的活性分別提高了14.86%、20.6%、30.71%和36.08%。連續(xù)灌胃小鼠30天后,與正常對照組相比,RGPs低劑量組使血清中SOD的活性提高,無顯著差異,對組織中SOD活性提高具有差異顯著性。RGPs中、高劑量組均能顯著提高血清和各組織中SOD的活性。RGPs中、低兩個劑量組對提高肝組織中的SOD活性無顯著差異。
4、RGPs對小鼠血清及各組織GSH-Px活力的影響
GSH-Px是生物體內(nèi)廣泛存在的抗氧化酶之一,能夠阻斷活性氧自由基對機(jī)體的進(jìn)一步損傷,使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物,是生物體內(nèi)重要的活性氧自由基清除劑。從表4可以看出,RGPs3個劑量組均可提高血清和各組織中GSH-Px的活性,并呈現(xiàn)劑量關(guān)系,其RGPs高劑量組對血清和肝、腎、脾中GSH-Px的活性分別提高了39.18%、38.25%、24.37%和59.22%。小鼠灌胃30天后,與正常對照組相比,RGPs低劑量組顯著提高血清和肝、腎組織中GSH-Px的活性,對脾組織中GSH-Px的活性提高無顯著差異。RGPs中、高劑量組均能顯著提高血清和各組織中GSH-Px的活性。RGPs中、低兩個劑量組對血清中的GSH-Px的活性提高無顯著差異。
三、結(jié)論
通過RGPs對小鼠體內(nèi)抗氧化活性的硏究可知,RGPs能顯著降低血清和肝、腎、脾組織中MDA的含量,并提高SOD和GSH-Px的活力,且呈現(xiàn)明顯的劑量關(guān)系。表明RGPs具有較好的清除體內(nèi)過多自由基的作用,從而防止自由基氧化對機(jī)體導(dǎo)致的損傷,進(jìn)而起到抗氧化作用。因此,RGPs具有一定的體內(nèi)抗氧化能力,為RGPs今后的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
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