北方偉業(yè)計量集團有限公司
對得到的多元線性回歸模型進行方差分析和顯著性檢驗,結果見表4,魔芋分、酵母浸粉和硫酸錳對酶活有極為顯著(p<0.01模型的擬合度(R-Squared)為0.9958,測量信噪比(AdeqPrecision)為48.993大于4;模型的矯正決定系數(shù)(AdjR-Squared)為0.9903且Pred-R-Squared為0.9323,兩者之間的差距小于0.2。
從以上分析可有,該模型與實際試驗擬合良好,試驗誤差小,證明本實驗采用響應面法優(yōu)化培養(yǎng)基是可行的。
(2)響應曲面圖分析
三因素之間的響應曲面見圖6,從中可以看出三者之間有明顯的交互作用。在試驗設計范圍之內(nèi),從圖6-a和圖6-b可以看出,在酵母浸粉和硫酸錳的添加量固定不變的情況下,產(chǎn)酶活力隨著魔芋粉添加量的增加而增大;從圖6-a和圖6-c可以看出,在魔芋粉和硫酸錳添加量固定的情況下,酶活力隨著酵母浸粉添加量的增加先上升后開始下降;從圖6--b和圖6-c可看出,在魔芋粉和酵母浸粉添加量固定不變的情況下,產(chǎn)酶活力隨著硫酸錳添加量的增加先上升后開始下降。
在本試驗取值范圍之內(nèi),以最大酶活為目標,根據(jù)軟件Design-Expert10.0.7分析,培養(yǎng)基的最佳配比為:魔芋粉3.0%、酵母浸粉2.734%、硫酸錳0.439%,預測酶活力為6.187U/mL,期望值為0.997。結合實際操作便利,將培養(yǎng)基添加量改為:魔芋粉3.00%、酵母浸粉2.70%、硫酸錳0.45%,在此條件下進行三次驗證實驗,測得酶活力平均值為6.179U/mL,與理論值的相對誤差很小,說明本實驗采用響應面法對培養(yǎng)基成分進行回歸分析,達到了參數(shù)優(yōu)化的目的。
三、結論與討論
以甘露聚糖為唯一碳源,從魔芋種植土壤中篩得一株產(chǎn)耐酸性β-甘露聚糖酶的菌株,所產(chǎn)酶在pH4酸性緩沖液中處理一小時后酶活力僅降低13%。通過16SrDNA測序并進行系統(tǒng)發(fā)育分析可知該菌為路德維希腸桿菌。對該菌的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行優(yōu)化,最終將該菌搖瓶發(fā)酵后粗酶液酶活從2.050U/mL提高到6.179U/mL,提高了三倍。
本研究分離得到的路德維希腸桿菌于2005年由HaraldHoffmann等人發(fā)現(xiàn)并命名,多用于對水中重金屬污染和土壤農(nóng)藥殘留的治理,也有報道該菌具有植物的促生長性,還有報道該菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶和β-木糖苷酶等。國內(nèi)外對該菌的研究較少,鑒于其對環(huán)境污染的治理與對植物的促生長作用及產(chǎn)各種酶,因此該菌在未來還是有不錯的研究及應用前景。本研究得到的路德維希腸桿菌從目前的實驗來看產(chǎn)酶活力不高且耐酸性不強,可通過誘變、改變代謝流等手段提高其產(chǎn)酶活力和耐酸性;鑒于該菌可應用于諸多領域,也有必要對該菌的生理生化特性等內(nèi)容進行深入研究,為進一步研究該菌和應用奠定基礎。
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