為建立高效液相色譜法(HPLC)測定馬香苓口服液白術內酯Ⅲ含量的方法，用色譜柱為ZORBAX SB-C18，以水和甲醇為流動相梯度洗脫，流速0.8 mL/min，柱溫25℃，檢測波長223 nm，進樣量30μL。結果顯示，白術內酯Ⅲ檢測質量濃度在0.57μg/mL～73.00μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系(y=1.356 7x+0.857 6，R2=0.992，n=6)，精密度、重復性、穩(wěn)定性試驗的平均相對標準偏差(RSD)分別為2.00%、8.58%和6.00%；加樣平均回收率為98.04%，RSD=11.89%，回收率良好。該方法準確穩(wěn)定，簡便可行，能夠很好的控制馬香苓口服液白術內酯Ⅲ的含量，也為該制劑質量控制提供了一種有效的方法。

馬香苓口服液是由廣藿香、白術、馬齒莧等制成的純中藥口服液，臨床主要用于治療病毒引起的仔豬腹瀉。研究表明，該制劑工藝穩(wěn)定可行，無刺激性，治療仔豬腹瀉總有效率達96%，治愈率達90%。為進一步控制該制劑的質量，便于臨床藥效學研究，故對該方劑做其定量的方法研究。白術具有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎之功效；用于脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動不安。在馬香苓口服液中作為臣藥，它的主要成分作用為白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ和蒼術酮等，該類成分具有調節(jié)胃腸道功能和促進營養(yǎng)物質吸收的作用，也是控制白術藥材質量的主要指標之一。據報道，其白術內酯Ⅲ含量可以作為評定中藥散劑、口服液水提工藝等指標。因此，采用高效液相色譜法(HPLC)測定本制劑中白術內酯Ⅲ的含量并做方法學研究，可以為該制劑的質量標準提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑

白術內酯Ⅲ(含量99.9%，20 mg， 批號：11978-201501)，中國食品藥品檢定研究院產品；馬香苓口服液，中國農業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所研制(批號20160324、20160616、20160623、20160625、20160704、20160705、20160712、20160714、20160717、20160721)；甲醇(色譜純，規(guī)格1 L，批號20161006)，天津川普偉業(yè)科技有限公司產品；水為超純水，石油醚(60℃～90℃，批號20160901)煙臺市雙雙化工有限公司產品；其余有機試劑均為分析純。

1.1.2 儀器與設備

DIONEX UItiMate 3000高效液相色譜儀，美國賽默飛世爾科技公司產品；NewClassic MS 電子天平，梅特勒-托利多上海有限公司產品；Milli-Q型超純水機，美國Millipore公司產品；KQ 3200DE型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產品。

1.1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6 mm×250 mm， 美國Agilent Technologies)，以水和甲醇為流動相梯度洗脫(表1)，流速0.8 mL/min， 柱溫25℃，檢測波長223 nm， 進樣量30 μL。

1.2 方法

溶液制備：以甲醇和500 mL/L甲醇水溶液為空白溶液。精密稱取白術內酯Ⅲ1.46 mg， 置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，密封，搖勻，即得濃度為0.73 mg/mL的對照品儲備液。精密移取白術內酯Ⅲ標準儲備液1 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成濃度為0.073 mg/mL，作為白術內酯Ⅲ對照溶液。量取中藥口服液25 mL于125 mL分液漏斗，加石油醚(60℃～90℃)振搖提取4次，每次40 mL，收集上層石油醚有機溶液，水浴揮干(水浴鍋溫度90℃)，殘渣加500 mL/L甲醇水溶液使其溶解，并定容至10 mL容量瓶，即得供試品溶液。取按處方比例并以同樣制備工藝的缺白術的陰性對照口服液，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。

2 結果

2.1 專屬性試驗

取空白、對照品、供試品和陰性對照溶液，過0.22 μm有機微孔濾頭于1 mL進樣瓶中，密封，參照文獻并按色譜條件自動進樣測定，每個樣品進樣2次，記錄色譜圖(圖1)，結果白術內酯Ⅲ對照品溶液理論板數為13327；在與白術內酯Ⅲ對照品溶液色譜峰對應的位置上，供試品(26.063 min)與其對照品(26.419 min)保留時間一致，其理論塔板數為21420，且與其他組分分離度大于1.5；陰性對照溶液在對照品與供試液相應的保留時間內未檢出色譜峰，表明樣品中其他成分不干擾白術內酯Ⅲ的測定。

2.2 線性關系考察

精密量取白術內酯Ⅲ對照液1 mL于2 mL容量瓶，加色譜甲醇定容至刻度，依次進行倍比稀釋得系列標準溶液，其濃度分別為73.00、36.50、18.25、9.13、4.56、2.28μg/mL，按色譜條件自動進樣上述系列溶液各30 μL，每個濃度進樣2次，記錄色譜圖并測定峰面積。以白術內酯Ⅲ峰面積(y)縱坐標，檢測質量濃度(x，μg/mL)為橫坐標進行線性回歸(圖2)，得回歸方程y=1.356 7x+0.857 6，R2=0.992，結果表明，白術內酯Ⅲ檢測質量濃度在0.57 μg/mL～73.00 μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.3 精密度試驗

精密量取對照品溶液，按色譜條件自動進樣30 μL，連續(xù)進針6次，記錄色譜圖，測定峰面積。計算結果保留時間RSD=3.04%，相對峰面積RSD=2.00%，表明儀器精密度良好。

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