2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性

隨機(jī)抽取11個單元的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性評估，見表1。

使用PCA培養(yǎng)基進(jìn)行測定時，F(xiàn)=0.67，小于查表值F0.05(10,22），其均勻性引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(bb)=2.9%。使用VRBA培養(yǎng)基進(jìn)行測定時，F(xiàn)=1.84，小于查表值F0.05(10,22），其均勻性引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(bb)=3.3%。說明標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在組內(nèi)不存在顯著性差異，其均勻性良好。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性

根據(jù)表2的短期穩(wěn)定性評估結(jié)果，基于PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基進(jìn)行測定，大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以在–20℃和4℃穩(wěn)定保存7天。根據(jù)表3的長期穩(wěn)定性評估結(jié)果，基于PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基進(jìn)行測定，其可以在–20℃穩(wěn)定保存6個月。因此，該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建議在–20℃的條件下儲存，運輸時建議使用干冰。

使用PCA培養(yǎng)基測定時標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)長期穩(wěn)定性引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(s)=6.0%；使用VRBA培養(yǎng)基測定時標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)長期穩(wěn)定性引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(s)=5.9%。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)經(jīng)由6家實驗室合作定值，每家實驗室分別使用PCA和VRBA培養(yǎng)基進(jìn)行測定。結(jié)果見表4，測量結(jié)果經(jīng)科克倫法檢驗為等精度，經(jīng)Grubbs和Dixon法檢驗未發(fā)現(xiàn)異常值，經(jīng)夏皮洛-威爾克法檢驗呈正態(tài)分布。使用PCA培養(yǎng)基測定時，大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值為7.1×103 CFU/g,A類相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(A)=1.7%；使用VRBA培養(yǎng)基測定時，大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值為6.1×103CFU/g,A類相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(A)=2.0%。

2.4 定值結(jié)果的不確定度評定

大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度由4部分組成：第1部分是A類相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(A)，來源于合作定值過程；第2部分是B類相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(B)，包括天平、移液器、稀釋因子帶來的不確定度；第3部分是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(bb)；第4部分是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)長期穩(wěn)定性引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(s)。將這4部分相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成后計算得到標(biāo)準(zhǔn)值的合成相對不確定度urel(C)，及擴(kuò)展不確定度U(k=2，置信概率95%）。結(jié)果（表5）表明，大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)基于PCA培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)值為(7.1±1.1)×103 CFU/g，基于VRBA培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)值為(6.1±1.0)×103 CFU/g。因此，本研究成功研制出具有2種特性量值的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

2.5 不同品牌PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基的生長率

使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)法，對5個品牌PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基的生長率進(jìn)行評價。結(jié)果如表6所示，待測PCA培養(yǎng)基的生長率均滿足PR≥0.84的要求，待測VRBA培養(yǎng)基的生長率均滿足PR≥0.83的要求，且PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基的評價結(jié)果和國標(biāo)方法的評價結(jié)果有很好的相關(guān)性。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以同時用于PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基生長率的評價。

3 結(jié)束語

本研究嘗試提出了一種新的微生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制思路，即使用多種培養(yǎng)基研制具有多種特性量值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并且研制出具有兩種特性量值的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。研制過程中同時使用PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性評估及多家實驗室合作定值。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性和穩(wěn)定性良好，基于PCA培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)值為(7.1±1.1)×103 CFU/g，基于VRBA培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)值為(6.1±1.0)×103 CFU/g。

GB 4789.28—2013及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中，大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株可以用于非選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基（TSA、PCA、營養(yǎng)瓊脂）以及選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基（VRBA、VRBA-MUG、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂）的生長率評價。本研究僅選取了一種非選擇性培養(yǎng)基PCA和一種選擇性培養(yǎng)基VRBA作為切入點，進(jìn)行大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制。研制的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以同時用于PCA培養(yǎng)基和VRBA培養(yǎng)基的生長率評價，具有方便快捷的優(yōu)點。在今后的工作中，項目組將逐步拓展該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適用的培養(yǎng)基范圍，從而提高微生物研究機(jī)構(gòu)、檢測機(jī)構(gòu)以及培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家的質(zhì)量控制效率。

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