目的

建立同時(shí)測定氫溴酸右美沙芬糖漿中主成分氫溴酸右美沙芬、雜質(zhì)5-羥甲基糠醛及防腐劑苯甲酸、羥苯乙酯含量的高效液相色譜方法。

方法

色譜柱為PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸二氫銨溶液，梯度洗脫，體積流量為1.0mL·min-1，柱溫為30℃，檢測波長為279nm，進(jìn)樣體積為20μL。結(jié)果：氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯的線性范圍分別為29.21～876.2、1.94～58.29、27.08～812.4、5.85～175.4μg·mL-1（r≥0.9997）。4種成分的平均加樣回收率分別為99.23%、98.86%、100.3%、98.51%，RSD分別為1.03%、1.52%、1.11%、1.64%（n=6）。

結(jié)論

該方法簡便、準(zhǔn)確，可用于測定氫溴酸右美沙芬糖漿中氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的含量。

氫溴酸右美沙芬糖漿為中樞性鎮(zhèn)咳藥，可抑制延腦咳嗽中樞而產(chǎn)生鎮(zhèn)咳作用，長期服用無成癮性和耐受性。該藥現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-341）-2003Z，收載于《國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》（第45冊），該標(biāo)準(zhǔn)中只有主成分氫溴酸右美沙芬的含量測定，并未對雜質(zhì)和防腐劑進(jìn)行質(zhì)量控制。

《中國藥典》2015年版四部規(guī)定糖漿劑中含蔗糖量應(yīng)不低于45%，因此本品中含有高濃度的蔗糖，極易產(chǎn)生糖的降解雜質(zhì)5-羥甲基糠醛（5-HMF）。5-HMF屬于2類遺傳毒性雜質(zhì)，具有致突變性、致敏性和遺傳毒性等多種毒副作用。目前遺傳毒性雜質(zhì)已成為藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)關(guān)注的焦點(diǎn)。

氫溴酸右美沙芬糖漿處方中還含有防腐劑苯甲酸或羥苯乙酯，防腐劑雖能夠抑制微生物在糖漿劑中生長和繁殖，但過量攝入對人體也會(huì)有一定的毒性，尤其是兒童用藥，如苯甲酸會(huì)損害神經(jīng)系統(tǒng)、具有細(xì)胞毒性和致癌等。羥苯酯類影響男性生殖系統(tǒng)和誘發(fā)女性乳腺癌等，故有必要對氫溴酸右美沙芬糖漿中的降解雜質(zhì)和防腐劑的含量進(jìn)行質(zhì)量控制。本研究建立HPLC法同時(shí)測定氫溴酸右美沙芬糖漿中的氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的含量，有利于提高本制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與藥品、試劑

1.1儀器

Waters2695高效液相色譜儀（含二極管陣列檢測器）；WatersEmpower色譜工作站；SartoriusBP211D型電子分析天平；KH-700DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2藥品與試劑

氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯對照品（純度分別為94.8%、99.2%、99.9%、99.9%，批號(hào)分別為100201-201204、111626-201912、100419-201703、100847-201604）；氫溴酸右美沙芬糖漿（廠家A，190202、190602、190802、200103，規(guī)格0.15%；廠家B，190205、190301、190411、190502，規(guī)格0.2%）；甲醇為色譜純；磷酸二氫銨、磷酸為分析純；水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-0.1mol·L-1磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加磷酸1mL，用水稀釋至1000mL）（B）；梯度洗脫（0～10min，15%A；10～11min，15%A→50%A；11～26min，50%A；26～27min，50%A→15%A；27～35min，15%A）；檢測波長：279nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL·min-1；進(jìn)樣體積：20μL。

2.2溶液的配制

2.2.1混合對照品溶液

分別精密稱取氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯對照品適量，用甲醇-水（1∶1）溶解配制成1.4604、0.09715、1.3540、0.2924mg·mL-1的混合對照品儲(chǔ)備液；精密量取該儲(chǔ)備液2mL，置10mL量瓶中，甲醇-水（1∶1）定容至刻度，搖勻，制成每毫升分別含上述成分0.2921、0.01943、0.2708、0.05848mg的混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液

精密量取供試品5mL，置25mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）適量，超聲處理10min，使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過即得。

2.2.3陰性樣品溶液

以溶劑甲醇-水（1∶1）作為陰性樣品溶液。

2.3專屬性考察

取上述混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

檢測表明，5-羥甲基糠醛、苯甲酸、氫溴酸右美沙芬、羥苯乙酯均能達(dá)到基線分離，待測成分色譜峰的理論塔板數(shù)均大于3000，各成分之間無干擾，證明該方法專屬性良好。

2.4線性關(guān)系考察

精密量取混合對照品儲(chǔ)備液0.2、0.5、1、2、4、6mL，分別用甲醇-水（1∶1）定容于10mL量瓶中，搖勻，即得系列混合對照品溶液。按“2.1”項(xiàng)的色譜條件對上述系列混合對照品溶液進(jìn)行測定，并繪制出橫、縱坐標(biāo)分別為質(zhì)量濃度（μg·mL-1）和峰面積（Y）的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的回歸方程及線性范圍（n=6），分別為Y=6.6002×103X-2.2593×104（r=0.9998，29.21～876.2μg·mL-1）；Y=1.3768×105X-3.2880×104（r=0.9997，1.94～58.29μg·mL-1）；Y=7.3378×103X-1.8058×104（r=0.9998，27.08～812.4μg·mL-1）；Y=3.2497×104X-2.3063×104（r=0.9997，5.85～175.4μg·mL-1）。

2.5進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取混合對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.32%、0.46%、0.26%、0.37%，表明儀器精密度良好。

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