維生素E作為一種天然抗氧化劑，具有清除體內(nèi)自由基、維持細(xì)胞膜的完整和正常功能以及防止脂質(zhì)過(guò)氧化等生理功能，蔬菜是人體攝取維生素E的主要來(lái)源，測(cè)定蔬菜中維生素E的含量，對(duì)于評(píng)價(jià)它的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)具有重要意義。

測(cè)定維生素E的方法主要有比色法、薄層法、熒光法、氣相法、高效液相色譜法等，比色法操作比較簡(jiǎn)單，但靈敏度較低;高效液相色譜法分辨率高，但操作復(fù)雜，成本高，對(duì)于大批量樣品測(cè)定比較困難;熒光法特異性強(qiáng)，干擾少，靈敏，快速，簡(jiǎn)便，對(duì)于測(cè)定大批量蔬菜中的維生素E是一種比較理想的方法。但普通熒光光譜法存在萃取劑石油醚對(duì)維生素E有干擾，使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性低的缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)探討了采用同步熒光光譜法測(cè)定蔬菜中維生素E，該方法消除了石油醚的干擾，提高了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

1實(shí)驗(yàn)部分

1,1試劑與儀器

維生素E(Sigma公司，進(jìn)口分裝)，用時(shí)未經(jīng)進(jìn)一步純化，溶于無(wú)水乙醇。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，所用溶液均用二次去離子水新鮮配制。

日立F-4500型熒光分光光度計(jì)(日本日立公司)。

1,2樣品的制備與光譜測(cè)定

維生素E采用周松的方法提取。吸取一定量的維生素E提取液于20mL棕色帶塞試管中，加入5.0mL分析純石油醚振蕩1min，靜置分層后(如有乳化現(xiàn)象，加少許無(wú)水乙醇)，用注射器移去下層，上層石油醚分別用蒸餾水洗滌2～3次固定激發(fā)波長(zhǎng)λex=295nm，在λem=300～500nm掃描維生素E普通熒光光譜;固定Δλ=30nm，λex=200～400nm下，測(cè)定同步熒光光譜，記錄其λex=295nm處的熒光值。

2結(jié)果與討論

2,1維生素E的激發(fā)光譜和熒光光譜

用含維生素E2.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液作校正光譜多次實(shí)驗(yàn)表明，維生素E的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜均為λex295nm/λem327nm，結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2，與項(xiàng)光華、李艷飛等人的報(bào)道相符。

2,2石油醚和維生素E的熒光光譜、同步熒光光譜

按照實(shí)驗(yàn)方法，掃描石油醚和維生素E(10.0mg/L)的熒光光譜和同步熒光光譜并進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，溶劑和維生素E在λem=327nm處熒光發(fā)射光譜相互重疊(圖3)。從兩者的同步熒光光譜可以看出，同步熒光法使2種物質(zhì)分別在λ=250nm和λ=290nm處有最大發(fā)射(Δλ=30nm)，從而消除了石油醚對(duì)維生素E測(cè)定的影響(圖4)。

2,3不同Δλ對(duì)維生素E同步熒光光譜的影響

采用同步熒光法測(cè)定蔬菜中的維生素E時(shí)，光譜形狀不僅與物質(zhì)本性有關(guān)，且與Δλ有關(guān)，Δλ越小，形成的同步光譜峰數(shù)越小、峰形越窄，但Δλ不能太小，只有當(dāng)Δλ與發(fā)射峰、激發(fā)峰之間的波長(zhǎng)相匹配時(shí)，才能產(chǎn)生比較強(qiáng)的熒光信號(hào)。2峰的分離情況通常用分離度R表示，當(dāng)R<1時(shí)，2峰有部分重疊;R≥1時(shí)，表示2峰能明顯分離，滿足分析要求;R=1.5時(shí)，表示2峰能完全分離。

本實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定了Δλ為10、20、30、40、50nm時(shí)維生素E和溶劑的同步熒光光譜，從圖5和表1可以看出，Δλ為10、20、30nm時(shí)，隨著Δλ的增加，同步熒光的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)且三者R>1，綜合圖5和表1，Δλ=30nm時(shí)，維生素E的同步熒光光譜的熒光強(qiáng)度最大，且能夠與溶劑的熒光光譜分離開，因此在實(shí)際測(cè)定中選擇了Δλ為30nm。

         
2,4線性范圍

將維生素E標(biāo)準(zhǔn)液配制成不同質(zhì)量濃度的系列溶液，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，其質(zhì)量濃度在0.01～10mg/L內(nèi)與其熒光強(qiáng)度成線性關(guān)系(圖6)，回歸方程為I=16.173ρ+1.1235，I為熒光強(qiáng)度，ρ為質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)r=0.9995，檢出限為0.0025mg/L。

2,5回收實(shí)驗(yàn)

取同等質(zhì)量的油菜樣品，分別加入一定量的維生素E的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述測(cè)定方法分別進(jìn)行處理、測(cè)定，計(jì)算樣品中維生素E的回收率(表2)。從表2可以看出，回收率為101.18%～101.58%，平均回收率為101.37%。

2,6實(shí)際樣品的測(cè)定

用上述的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定實(shí)際樣品中維生素E的含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3，從表3可以看出，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.4%，1.17%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較滿意。

3小結(jié)

通過(guò)熒光光譜學(xué)對(duì)蔬菜中維生素E含量研究表明，以石油醚作萃取劑時(shí)，普通熒光光譜法不能夠消除萃取劑對(duì)維生素E的干擾，采用同步熒光光譜法，當(dāng)Δλ=30nm時(shí)維生素E的熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，且能消除萃取劑石油醚的干擾作用。而且在0.1～10mg/L內(nèi)熒光強(qiáng)度和維生素E濃度呈線性關(guān)系，回歸方程為I=16.17ρ+1.1235，相關(guān)系數(shù)r=0.9995，樣品的平均回收率為101.37%，實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差(RSD)<5，0%，該法操作簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好，對(duì)大批量測(cè)定蔬菜中維生素E不失為一種理想的方法。

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