北方偉業(yè)計量集團有限公司
(7)DPPH自由基清除力測定
根據(jù)DPPH與乙醇溶液顯色,當(dāng)有抗氧化劑存在時,使DPPH乙醇溶液顏色消退,從而導(dǎo)致吸光強度發(fā)生改變的方法測定DPPH自由基清除能力。參照Sun等的實驗方法并做適當(dāng)修改。分別精確配制0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL樣品多糖溶液,用95%乙醇溶液配制0.2mmol/LDPPH溶液,依次在反應(yīng)體系中加入2.0mLDPPH乙醇溶液(0.2mmol/L)和2.0mL不同濃度的多糖溶液。將反應(yīng)體系混勻,在室溫下靜置30min,在517nm處測定各反應(yīng)液的吸光值??瞻捉M的多糖溶液由95%乙醇溶液代替。對照組用同等濃度的VC溶液代替多糖溶液。按照下式計算DPPH自由基的清除率。
DPPH自由基清除率(%)=(Ao-A)/Ao×100%,其中,Ao:空白組的吸光值;A:樣品組的吸光值。
二、結(jié)果與分析
1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
以葡萄糖含量為橫坐標(biāo),對應(yīng)吸光值為縱坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程(如圖2):
2、樺剝管菌多糖提取的單因素實驗
(1)水浴溫度對樺剝管菌多糖得率的影響
從圖3可以看出,水浴溫度在40℃~70℃范圍內(nèi)時,隨著水浴溫度的增高,樺剝管菌多糖得率不斷增加,當(dāng)水浴溫度達(dá)到70℃時,多糖得率最大,在水浴溫度進(jìn)一步增高時,多糖得率有所降低。當(dāng)溫度較低時,多糖的溶解與滲透能力較低,樺剝管菌多糖不易有效溶出。當(dāng)溫度較高時,高溫“崩解”細(xì)胞并增強分子熱運動,促使部分多糖鏈降解更易溶出。但當(dāng)溫度過高時,又會破壞多糖成分,引起多糖降解,從而導(dǎo)致提取率的下降。因此選擇水浴溫度60、70、80℃進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實驗分析。
(2)超聲溫度對樺剝管菌多糖得率的影響
從圖4可以看出,樺剝管菌多糖得率隨著超聲溫度的升高,呈現(xiàn)出先升后降的趨勢,超聲溫度在70℃時,多糖得率最大,為7.28%,但與其他超聲溫度影響下的多糖得率相差不大,因此不選擇超聲溫度進(jìn)行后續(xù)的響應(yīng)面優(yōu)化實驗分析。
(3)超聲時間對樺剝管菌多糖得率的影響
從圖5可以看出,超聲時間在10~30min范圍內(nèi)時,隨著超聲時間的增加,樺剝管菌多糖得率為6.24%~6.99%,變化不明顯,與其他因素相比較,超聲時間影響較小,因此不選擇超聲時間進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實驗分析。
(4)超聲功率對樺剝管菌多糖得率的影響
從圖6可以看出,超聲功率在60~100W的范圍內(nèi),樺剝管菌多糖得率變化較明顯,當(dāng)超聲功率在80W時,其多糖得率達(dá)到相對最大值,超聲功率也是影響多糖得率的因素之一,多糖得率在超聲功率為90W時下降可能是由于超聲波過強的剪切力和沖擊波對多糖分子有所破壞,導(dǎo)致多糖得率有所降低。因此選擇超聲功率70、80、90W進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實驗分析。
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