（2）正交試驗(yàn)結(jié)果

基于單因素試驗(yàn)結(jié)果，正交試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果見表1。

表1極差結(jié)果顯示，水料比(C)對末水壇紫菜多糖提取率影響最大，其次是提取溫度(A)，而提取時間(B)對多糖提取率影響最小。末水壇紫菜多糖最優(yōu)提取工藝為A₂B₂C₁，按此工藝提取多糖，然后用2％(mg／mL)的木瓜蛋白酶在45℃下水解60min去除蛋白，多糖提取率為8.5％，高于表1中所有試驗(yàn)結(jié)果。因此，超聲波輔助水提末水壇紫菜多糖最優(yōu)工藝參數(shù)確定如下：提取溫度65℃、提取時間3.5min、水料比30:1(mL／g)。

2、木瓜蛋白酶去除蛋白工藝優(yōu)化結(jié)果

（1）單因素試驗(yàn)結(jié)果

加酶量、水解溫度、水解時間三個因素對末水壇紫菜多糖提取率的影響見圖2。

由圖2可知：①多糖提取率隨加酶量的增加而增大，當(dāng)加酶量超過2％(mg／mL)后，多糖提取率增加緩慢并漸趨平緩。這是因?yàn)樵谝欢笣舛确秶鷥?nèi)，底物蛋白質(zhì)水解率隨酶濃度增加而明顯增加，因而測得的多糖濃度也不斷增大，但當(dāng)酶濃度超過該范圍后，蛋白質(zhì)的水解率增加緩慢直至趨于平衡，此時測得的多糖濃度也逐漸穩(wěn)定。②隨著水解溫度的增加，多糖提取率先增大后減小，在50℃時，多糖提取率最高。這說明該溫度處于木瓜蛋白酶的最適反應(yīng)溫度范圍內(nèi)，此時蛋白質(zhì)水解率最高，因而測得多糖濃度最高。③隨著水解時間的延長，多糖提取率先增大后減小，說明在一定時間范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)水解率隨著水解時間延長而增加，因而測得的多糖濃度也不斷增大，但時間過長會引起木瓜蛋白酶變性失活，使蛋白質(zhì)水解率下降，另外長時間也會引起多糖的降解。

（2）正交試驗(yàn)結(jié)果

基于單因素試驗(yàn)結(jié)果，正交試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果見表2。

表2極差結(jié)果顯示，水解溫度(E)對末水壇紫菜多糖提取率影響最大，加酶量(D)的影響力次之，而水解時間(F)對多糖提取率影響最小。木瓜蛋白酶去除蛋白最優(yōu)工藝為D₃E₂F₁。采用超聲波輔助水提法最優(yōu)工藝提取多糖后，再用D₃E₂F₁工藝去除蛋白，最終多糖提取率為9.6％，與表2中8號試驗(yàn)結(jié)果9.5％基本持平。8號試驗(yàn)工藝為D₃E₂F₁，即加酶量為3％，從節(jié)約試劑角度選用加酶量為2％的D₃E₂F₁工藝更合理。最終確定木瓜蛋白酶去除蛋白最優(yōu)工藝如下：加酶量2％(mg／mL)、水解溫度50℃、提取時間60min。

三、結(jié)論與討論

(1)末水壇紫菜作為壇紫菜生產(chǎn)中的下腳料，經(jīng)濟(jì)價值較低。然而末水壇紫菜中多糖含量非常高，如能高效提取，則可大大提高末水壇紫菜的附加值?？紤]到超聲波破碎細(xì)胞后多糖易溶出，以及木瓜蛋白酶可高效水解粗多糖中的蛋白質(zhì)，因而本研究采用超聲波輔助水提一蛋白酶法提取末水壇紫菜多糖，以期提高多糖提取率。

(2)首先通過單因素試驗(yàn)考察了提取溫度、提取時間及水料比三個因素對多糖提取率的影響，并通過正交試驗(yàn)獲得了超聲波輔助水提末水壇紫菜多糖的最優(yōu)工藝參數(shù)：提取溫度65℃、提取時間3.5min、水料比30:1(mL／g)。然后，通過單因素試驗(yàn)考察了加酶量、水解溫度及水解時間對多糖提取率的影響，并通過正交試驗(yàn)獲得了木瓜蛋白酶去除蛋白的最優(yōu)工藝參數(shù)：加酶量2％(mg／mL)、水解溫度50℃、提取時間60min。在上述最優(yōu)條件下提取末水壇紫菜多糖，多糖提取率達(dá)9.5％。目前，文獻(xiàn)報道的紫菜多糖提取率結(jié)果差別較大，如王賢等采用微波法提取末水壇紫菜多糖，提取率為5.054％；張雙靈和吳瓊英等均采用微波法提取條斑紫菜多糖，提取率分別為8.47％和5.358；而馬波等采用超聲波輔助堿性果膠酶提取條斑紫菜多糖，得率為13.8％?？梢?，超聲波輔助水提-蛋白酶法是一種提取紫菜多糖的有效方法。

(3)末水壇紫菜提取多糖后，余料可繼續(xù)用于提取其他活性成分或直接用作肥料或飼料，從而使末水壇紫菜得到最大程度利用。檢測分析末水壇紫菜多糖的分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)組成及其生物活性，將是我們今后的研究重點(diǎn)。

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