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葡萄籽維生素E軟膠囊中原花青素和維生素E的快速測定(二)

發(fā)布時間:2021-01-02 18:47 編輯者:周世紅

(4)液相色譜條件

色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,DikmaDiamons訂C18(4.6mm×150mm,5μm);流動相:甲醇;流速:1.0mL/min;檢測波長:284nm柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。

(5)標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線

精密稱取105℃干燥至恒重的原花青素對照品28.63mg和維生素E醋酸酯對照品12.42mg于同一個10mL容量瓶中,加適量甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得到混合對照品貯備液。該貯備液避光保存?;旌蠘?biāo)準(zhǔn)貯備液適量,逐級稀釋,配制成原花青素濃度為0.2806、0.8417、1.4028、1.9640、2.8057mg/mL,維生素E醋酸酯濃度為0.1236、0.3707、0.6179、0.8651、1.2358mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,DikmaDiamons訂C18(4.6mm×150mm,5μm);流動相:甲醇;流速:1.0mL/min;檢測波長:284nm柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。的色譜條件進(jìn)樣分析,記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標(biāo),對照品濃度為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,原花青素在0.2806~2.8057mg/mL濃度范圍內(nèi),維生素E醋酸酯在0.1236~1.2358mg/L濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。二者的線性相關(guān)系數(shù)均為0.999以上,兩組分線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)如表1所示。

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二、結(jié)果與分析

1、紫外最大吸收波長的選擇

將維生素E醋酸酯對照品溶液注入液相色譜儀(配備DAD紫外檢測器),開啟光譜采集,在主成分峰位置觀察最大吸收波長(見圖2)。結(jié)果表明:維生素E醋酸酯對照品的最大吸收波長與檢測波長284nm一致。

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2、樣品處理時超聲時間的選擇

本試驗(yàn)同時考察5個不同超聲提取時間,分別為5min,10min,20min,30min,40min,對原花青素及維生素E加標(biāo)樣品的提取效果,回收率隨時間變化關(guān)系如圖3。

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結(jié)果顯示,在超聲提取5min情況下,樣品中原花青素和維生素E兩組分提取不完全,回收率較低;當(dāng)超聲時間延長至10min時,兩組分回收率有所增加,當(dāng)超聲提取時間延長至20min時,提取液中兩組分回收率均達(dá)到最高;超聲提取30min、40min后兩組分回收率基本穩(wěn)定且略有下降,因此實(shí)驗(yàn)采用超聲提取20min的方法可有效提取葡萄籽維生素E軟膠囊中的原花青素和維生素E。

3、穩(wěn)定性考察

稱取葡萄籽維生素E軟膠囊(批號20190115)內(nèi)容物約100mg,精密稱定。精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊(批號20190115)內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中,加入10mL甲醇,置于70℃水浴中加熱,振搖使內(nèi)容物分散,立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯,洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶,超聲提取20min,取出,冷卻至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾,作為供試品溶液。分別于制備后0,2,4,6,8,10,12h進(jìn)樣測定,記錄色譜圖,計(jì)算得12h內(nèi)原花青素色譜峰面積RSD為0.3%,維生素E醋酸酯色譜峰面積RSD為0.1%,說明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定(見表2)。

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4、重復(fù)性試驗(yàn)

稱取葡萄籽維生素E軟膠囊(批號20190115)內(nèi)容物6份,每份約100mg,精密稱定。精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊(批號20190115)內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中,加入10mL甲醇,置于70℃水浴中加熱,振搖使內(nèi)容物分散,立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯,洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶,超聲提取20min,取出,冷卻至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾,作為供試品溶液。計(jì)算得6份樣品原花青素與維生素E(以α-生育酚計(jì))含量平均值分別為41.44g/1009(RSD為0.9%)、16.80g/100g(RSD為1.1%),表明本法重復(fù)性良好(見表3)。

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