2.2適宜條件的選擇

2.2.1反應酸度

取甜蜜素標準操作液1.00mL?維多利亞藍B操作液2.00mL時，按1.4節(jié)方法考察1.00mLpH3.0~9.8范圍的Tris-HCl溶液對甜蜜素-維多利亞藍B體系ΔIRLS的影響，結果見圖2?從ΔIRLS-pH曲線可知，甜蜜素與維多利亞藍B反應所需加入的Tris-HCl溶液的pH為9.27，當加入的溶液的pH>9.27或<9.27時，體系的ΔIRLS均有不同程度降低，pH9.27時，體系的ΔIRLS較大，靈敏度較高?故實驗選用pH9.27Tris-HCl溶液來控制該反應的酸度?

2.2.2Tris-HCl溶液(pH9.27)的用量

取甜蜜素標準操作液1.00mL?維多利亞藍B操作液2.00mL，按1.4節(jié)方法考察0.50~3.00mL范圍的pH9.27Tris-HCl溶液對甜蜜素-維多利亞藍B體系ΔIRLS的影響，結果見圖3?從ΔIRLS-VpH9.27曲線可知，甜蜜素與維多利亞藍B反應所需加入Tris-HCl溶液(pH9.27)的最適用量為1.50mL，溶液用量大于或小于1.50mL，體系的ΔIRLS均有不同程度下降?故實驗選擇體系靈敏度最大時的Tris-HCl(pH9.27)溶液用量為1.50mL?

2.2.3維多利亞藍B濃度取甜蜜素標準操作液1.00mL?pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL，按1.4節(jié)方法考察0.50~3.00mL范圍的維多利亞藍B操作液對甜蜜素-維多利亞藍B體系ΔIRLS的影響，結果見圖4?從ΔIRLS-c維多利亞藍B曲線可知，維多利亞藍B的最適濃度為2.50×10-5mol/L(即維多利亞藍B操作液的最適用量為2.50mL)，當維多利亞藍B濃度大于或小于該值時，體系ΔIRLS均有不同程度下降，當<2.50×10-5mol/L時，維多利亞藍B用量不夠，與甜蜜素反應不完全;當>2.50×10-5mol/L時，又因維多利亞藍B過量使自身聚集作用增強從而影響與甜蜜素間的反應，靈敏度隨之下降?故實驗選擇體系靈敏度最大時的維多利亞藍B溶液的濃度即2.50×10-5mol/L?

2.2.4試劑加入順序

取甜蜜素標準操作液1.00mL?pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL?維多利亞藍B操作液2.50mL，按1.4節(jié)方法考察這幾種物質在加入順序不同時對體系ΔIRLS的影響?結果顯示，這幾種物質加入的先后順序對甜蜜素與維多利亞藍B反應的ΔIRLS有一定影響?當加入順序為維多利亞藍B溶液?Tris-HCl溶液?甜蜜素溶液時，體系的ΔIRLS=1315(相對于其他加入順序，該順序的ΔIRLS最大)，靈敏度相對其他順序最高?故實驗選擇此最佳順序加入各物質?

2.2.5反應時間及穩(wěn)定性

按上述選定的最佳條件，考察甜蜜素與維多利亞藍B的反應在5~100min范圍內對體系ΔIRLS的影響?結果顯示，反應從開始至20min時，隨著反應時間的增加，體系ΔIRLS逐漸增大，表明此時間段的反應并未完全;當反應至20~70min范圍，隨著反應時間的增加，體系的ΔIRLS不再增大，基本處于穩(wěn)定狀態(tài)，表明此時間段內反應已完全，并可穩(wěn)定50min;當反分析與檢測2020年第46卷第5期(總第401期)273應至70min后，體系的ΔIRLS隨時間的增加而逐漸下降，表明生成的新物質在此段時間已不再穩(wěn)定?故測定時間選在新物質穩(wěn)定時間段內進行?

2.3工作曲線及相關參數(shù)

按1.4節(jié)的實驗方法，配制0.00?0.50?1.00?1.50?2.00mL甜蜜素標準操作液的標準系列溶液，掃描RLS光譜，作甜蜜素的標準曲線，見圖5?該方法的一元線性回歸方程為ΔIRLS=14.20+7038ρ，相關系數(shù)r=0.9997，線性范圍為0.004~0.4mg/L，檢出限為0.0035mg/L，面包和餅干的定量限為2.69mg/100g，飲料的定量限為29.2mg/L?

2.4離子強度的影響
 

室溫下，考察了不同質量濃度的NaCl溶液對體系ΔIRLS的影響?結果顯示，7400倍的NaCl溶液對甜蜜素的測定無影響?故離子強度不影響甜蜜素的測定?

2.5共存物質的影響

室溫下，考察了某些外來物質對測定0.201mg/L甜蜜素的影響?結果顯示，相對誤差≤±5%時，500倍的Ca2+?Cu2+?K+?Mn2+?Mg2+?Sr2+?NO-3?I-?L-組氨酸?L-谷氨酸?L-丙氨酸?L-色氨酸?葡萄糖?麥芽糖?蔗糖?檸檬酸三鈉，200倍的L-賴氨酸?L-白氨酸?L-亮氨酸?甘氨酸?L-異亮氨酸?乳糖?NH+4?Fe2+?C2O2-4?SO2-3?SO2-4?S2O2-3，50倍的檸檬酸?蘋果酸?山梨酸?酒石酸?尿素?淀粉?維生素B12?安賽蜜?Sn2+?Fe3+?Ba2+?Al3+?Pb2+?CO2-3?Ac-?PO3-4等不干擾測定?故本法有很好的選擇性?

2.6樣品分析
 

準確移取各待測液0.20mL代替1.4節(jié)實驗方法中的甜蜜素標準操作液，加入最佳條件下的維多利亞藍B和Tris-HCl溶液，用水定容至10mL?按實驗方法測定面包?餅干及飲料中的甜蜜素含量，并與GB1886.37—2015比較?從表1數(shù)據(jù)可知，測定結果與GB法基本一致，統(tǒng)計學檢驗結果表明新方法具有可靠性?加標回收試驗:準確稱取1#和2#已粉碎?混勻的面包?餅干樣品各3份，每份2~3g(精確至±0.0001g)，分別置于小燒杯中;準確移取3#和4#飲料各3份，每份10.00mL，分別置于小燒杯中?在1#~4#的小燒杯樣液中，分別往同一樣液的3份燒杯中加入0.50?1.50和3.00mL甜蜜素貯備液，后續(xù)操作按1.3節(jié)樣品處理方法進行，制得各待測液?取各待測液0.20mL，按實驗方法測定各待測液中甜蜜素的含量(n=5)，求回收率，以判斷方法的準確度?結果見表2?表2中加標回收率和相對標準偏差表明新方法有較高的準確度和精密度?
 

結論
 

維多利亞藍B-甜蜜素體系用于食品中甜蜜素的測定，該方法具有操作簡單?靈敏度高?選擇性好等優(yōu)點，準確度和精密度滿足定量分析要求，并有較寬的線性范圍?測定結果的準確度與國標法相比無顯著性差異?本方法適用于焙烤食品中低脂低蛋白的面包?餅干及飲料中甜蜜素的快速測定?

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