植物飲料是一類（除果蔬汁、咖啡和茶外）以非果蔬類植物可食用的根、莖、葉、花、果及植物自身分泌的汁液等為原料經加工或發(fā)酵制成的液體飲料。由于植物飲料的原料和提取物不同，功效方面或多或少都會對人體起到一些保健作用，占據著一定的市場份額。商家為節(jié)約成本和改善植物飲料的口感，在植物飲料中加入安賽蜜、甜蜜素、糖精鈉、阿斯巴甜等合成甜味劑和苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑。因此，建立快速、準確測定植物（類）飲料中多種合成食品添加劑的方法顯得尤為重要。我國國家標準 GB2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》對植物（類）飲料中合成甜味劑和防腐劑的最大使用量作出了明確規(guī)定，如安賽蜜為 0.3g/kg、甜蜜素為 0.65g/kg、苯甲酸為 1.0g/kg 和山梨酸為 0.5g/kg 等。目前已報道的食品中防腐劑和甜味劑的檢測方法主要有分光光度法、離子色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜 - 串聯質譜法、離子色譜 - 串聯質譜法等。其中，分光光度法因設備靈敏度受限，不適用于痕量分析；離子色譜法對樣品的要求比較高，適用于基質較為干凈的液體樣品；氣相色譜法常需將化合物衍生化或進行其他反應后檢測，如甜蜜素，多組分同時分析有一定難度；高效液相色譜法同時測定多組分時選擇性較差，且存在樣品假陽性現象。色譜 - 質譜聯用法由于其靈敏度高、選擇性好，對低濃度的目標組分也能準確定量測定，適用于多組分同時進行分析。本試驗采用超高效液相色譜 - 串聯質譜儀，建立了對植物（類）飲料中 3 種防腐劑和 4 種合成甜味劑同時測定的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

樣品：涼茶、冬瓜茶、菊花茶均購自本地零售超市和商店。

儀器：Triple Quad 6500+ 串聯質譜儀（美國AB Sciex 公司）；LC-30AD 超高效液相色譜儀（日本 Shimadzu 公司）；AL-204 萬分一電子天平（瑞士 Mettler Toledo 公司）；UX620H 千分一電子天平（日本 Shimadzu 公司）；Milli-Q 超純水系統(tǒng)（美國 Millipore 公司）；BL22-600B 超聲波清洗機（上海比郎儀器有限公司）；Multi Reax全能型漩渦振蕩器（德國 Heidolph 公司）。試劑：甲醇、乙腈（色譜純，美國 Merck 公司）；甲酸（色譜純，德國 CNW 公司）；乙酸銨（色譜純，美國 ROE 公司）；山梨酸、苯甲酸和糖精鈉標準溶液（1.00×103 mg/L，中國計量科學研究院）；安賽蜜標準溶液（1.00×103 mg/L，農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所）；甜蜜素（99.1%，德 國 Dr. Ehrenstorfer GmbH 公 司 ）； 脫 氫 乙 酸（99.5%，美國 Chem Service 公司）；阿斯巴甜（99.0%，美國 Supelco 公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件
色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18 柱 （2.1mm×100mm，1.7μm）； 進 樣 體 積：5μL；流速：0.25mL/min； 柱 溫：35 ℃； 流 動 相：A-10mmol/L 乙酸銨，B- 乙腈，梯度洗脫條件如下表 1。

1.2.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源，負離子模式（ESI-）；氣體溫度（TEM）：450℃ ；電噴霧電壓（IS）：-4500V；氣簾氣壓力（CUR）：35psi；碰撞氣壓力（CAD）：9psi；霧化氣壓力（GS1）：40psi；輔助氣壓力（GS2）：35psi；掃描模式：多反應監(jiān)測（MRM）；7 種目標化合物的 MRM 參數見表 2。

1.2.3 標準曲線的配制

標準儲備液：分別準確稱取甜蜜素、阿斯巴甜和脫氫乙酸標準品 0.01g 于 3 個 10mL 容量瓶中，除脫氫乙酸用適量 25% 乙腈 - 水溶液（V/V）超聲輔助溶解并定容至刻度外，其他標準品用適量超純水溶解后并定容至刻度，配制成1.00×103mg/L 儲備液，于 4℃冰箱中保存?；旌蠘藴嗜芤海悍謩e取一定體積的上述標準儲備液和山梨酸、苯甲酸、糖精鈉和安賽蜜標準原液于同一個 10mL 容量瓶中用超純水定容，混勻后制得含安賽蜜 2.50mg/L、苯甲酸 25.0mg/L、山梨酸 100mg/L、脫氫乙酸 100mg/L、糖精鈉10.0mg/L、甜蜜素 5.00mg/L 和阿斯巴甜 10.0mg/L混合標準溶液，于 4℃冰箱中保存。混合標準工作液：分別移取適量體積的混合標準溶液，用超純水配制成系列混合標準工作液，現配現用。

1.2.4 樣品處理

準確稱量混合均勻的植物飲料樣品 1g（精確至 0.001g）于 10mL 比色管中，用超純水稀釋定容至刻度，超聲輔助混勻，過 0.22μm 水相微孔濾膜后直接上機進樣分析。

1.2.5 定量限和檢出限試驗

將上述配制好的混合標準工作液按優(yōu)化好的儀器條件上機進行測定，以目標組分色譜峰面積對相應的標準溶液質量濃度進行線性回歸分析，得到各自的線性回歸方程和相關系數。分別對各目標化合物線性范圍的最低濃度點進行信噪比分析，以 S/N=3 時對應的樣品質量濃度為方法檢出限，以 S/N=10 時對應的樣品質量濃度為方法定量限，結果見表 3。

1.2.6 回收率和精密度試驗

市面上植物（類）飲料品種繁多，比較有代表性的是涼茶、菊花茶和冬瓜茶，故選取這 3 種植物飲料進行加標回收試驗。在稱好的樣品中準確加入一定量的 7 種食品添加劑混合標準溶液，配成低、中、高 3 個不同添加水平，按上述實驗方法處理，平行測定 6 次，扣除樣品本底值后計算結果見表 4。

2 結果與分析

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 質譜條件的優(yōu)化

實驗采用注射泵直接進樣的方式將預先配制好的 0.200mg/L 各個標準溶液逐一注入串聯質譜儀中，在 ESI 正離子和 ESI 負離子模式下分別進行 Q1MS（Q1）全掃描，確定好電離方式后選擇響應較高的準分子離子作為母離子。結果顯示，大部分目標化合物在 ESI 負離子監(jiān)測模式下的準分子離子質譜豐度響應值高于正離子模式。在Product Ion（MS2）掃描中選取信號穩(wěn)定且豐度最強和次強的碎片離子分別作為定量 / 定性離子，然后在 MRM 監(jiān)測方式下建立離子對通道優(yōu)化各目標化合物的最佳錐孔電壓和碰撞能量。苯甲酸和脫氫乙酸的定性離子響應較低。優(yōu)化后所得的7 種添加劑質譜參數見表 2，利用儀器的自動優(yōu)化功能得到其他離子源參數見 1.2.2 質譜條件。

聲明：本文所用圖片、文字來源《中國食品添加劑》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯系

相關鏈接：甜蜜素，脫氫乙酸，植物