近年來(lái),隨著各種食品問(wèn)題的突發(fā)事件頻繁發(fā)生,食品安全已經(jīng)引起了社會(huì)各方面的廣泛關(guān)注,傳統(tǒng)的食品安全測(cè)檢技術(shù)因操作復(fù)雜,耗時(shí)長(zhǎng),成本高等特點(diǎn),無(wú)法滿足當(dāng)前檢測(cè)需求,因此建立快速、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)手段成為保障食品安全的研究重點(diǎn)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)具有靈敏度高、特異性好、分析速度快、簡(jiǎn)便的操作優(yōu)勢(shì),受到越來(lái)越多的食品安全領(lǐng)域人員青睞。CLIA能夠很靈敏的對(duì)有毒有害物質(zhì)進(jìn)行區(qū)別,能檢測(cè)出不同分子量大小的抗原、半抗原和抗體,同時(shí)還能應(yīng)用于核酸探針,它目前被廣泛用于食品、醫(yī)療和環(huán)境等領(lǐng)域。根據(jù)近5年的文獻(xiàn)報(bào)道,本文簡(jiǎn)單概述了CLIA技術(shù),并從農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、違禁添加物、病原微生物以及生物毒素等方面在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用作了詳細(xì)綜述,對(duì)該技術(shù)進(jìn)行了展望。

1引言

近年來(lái),隨著各種食品安全問(wèn)題的頻繁發(fā)生,食品安全已經(jīng)引起了社會(huì)各方面的廣泛關(guān)注。這種情況下,食品安全檢測(cè)技術(shù)顯得尤為重要,傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)不能滿足檢測(cè)需求,因此建立靈敏、準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)方法是保證食品安全的需要?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)是將化學(xué)發(fā)光與免疫技術(shù)(抗原與抗體反應(yīng))結(jié)合而建立起的一種免疫分析方法。它是一種高特異性、靈敏度好的檢測(cè)分析技術(shù),因而在食品安全領(lǐng)域成為研究熱點(diǎn)。這種方法可以十分靈敏地對(duì)有害物質(zhì)進(jìn)行區(qū)別,能檢測(cè)出不同分子量大小的半抗原、抗原和抗體,還能應(yīng)用于核酸探針。目前化學(xué)發(fā)光免疫分析方法主要在臨床,環(huán)境、食品等檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。有研究表明,化學(xué)發(fā)光免疫分析比其他免疫分析方法更敏感,相比于傳統(tǒng)的酶免疫分析(enzyme linked immunoassay,ELISA)靈敏度高10倍,靈敏性和檢測(cè)范圍要高于ELISA方法和其他免疫技術(shù),具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)勢(shì),在食品安全領(lǐng)域發(fā)展迅速。本文主要從化學(xué)發(fā)光免疫分析在食品安全農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、違禁添加物等幾個(gè)方面的應(yīng)用進(jìn)行綜述,以期為化學(xué)免疫分析在食品安全方面的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

2 CLIA的概述

2.1 CLIA原理

1977年,Cheng等首次建立CLIA以來(lái),該方法經(jīng)歷了4個(gè)階段的發(fā)展,主要包括許多新的材料、技術(shù)、工藝和儀器不斷完善和普及。CLIA是將高靈敏化學(xué)發(fā)光技術(shù)與特異性免疫反應(yīng)相結(jié)合,建立的一種免疫分析方法,可以滿足小分子在低濃度下的檢測(cè)需要?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析分為2個(gè)部分,免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將標(biāo)記物質(zhì)直接標(biāo)記在抗原或抗體上,經(jīng)過(guò)特異性反應(yīng)后,形成2抗體復(fù)合物。然后對(duì)標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),來(lái)測(cè)定待測(cè)物?；瘜W(xué)發(fā)光(chemiluminescence,CL)是化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中的一種特殊現(xiàn)象。反應(yīng)產(chǎn)物是在反應(yīng)激發(fā)態(tài)下被激發(fā),當(dāng)從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí),以光輻射的形式釋放出一定量的能量。該方法既避免了放射性同位素應(yīng)用對(duì)放射免疫分析的污染風(fēng)險(xiǎn),又克服了儀器復(fù)雜、背景干擾等缺點(diǎn),該方法靈敏度高,特異性強(qiáng),無(wú)輻射,標(biāo)簽有效期長(zhǎng),自動(dòng)化程度高,是現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)的重要手段。

2.2 CLIA分類

根據(jù)化學(xué)發(fā)光劑,一般可分為3類:直接化學(xué)發(fā)光免疫分析、酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析。

直接化學(xué)發(fā)光分析是抗原或抗體直接被化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記的免疫測(cè)定方法,常用的發(fā)光體系有魯米諾類和吖啶酯類。酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析是以酶標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫反應(yīng)。目前常用的標(biāo)記酶是辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)。發(fā)光底物分別為魯米諾和1,2-二氧環(huán)乙烷衍生物(AMPPD)。在傳統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)中,由于微孔板的比表面積較低,采用物理吸附的方法直接標(biāo)記到抗原或抗體酶上的,裝載的酶量小,存在信號(hào)弱、時(shí)間短、強(qiáng)度低。為了提高發(fā)光信號(hào)和靈敏度在分析過(guò)程中加入催化劑和增強(qiáng)劑。如酶,苯酚衍生物,離子或金屬納米粒子等。隨著納米材料的發(fā)展,通過(guò)修飾納米材料的表面,裝載更多的HRP,有效地催化CL過(guò)程,實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大,提高了方法的靈敏度和檢測(cè)的多樣性。電化學(xué)發(fā)光免疫分析是在電極表面進(jìn)行。與前者方法不同,它需要以三丙胺(tripropylamine,TPA)作為電子供體,電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗原或抗體,在電場(chǎng)中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光2個(gè)過(guò)程。常用的發(fā)光體系為三聯(lián)吡啶釕。

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