3、單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果與分析

陳皮乙酸乙酯提取物經(jīng)柱層析分為三個(gè)極性洗脫物，其中石油醚：乙酸乙酯=1∶1的洗脫物和乙酸乙酯洗脫物經(jīng)制備薄層層析法各得到三個(gè)主要化合物，而抗氧化作用較強(qiáng)且含量較高的化合物1為淡黃色結(jié)晶狀粉末，熔點(diǎn)為151.7℃～153.4℃，高效液相色譜圖(HPLC圖，見(jiàn)圖7)結(jié)果顯示其純度較好。
 

該化合物的紅外光譜圖(IR圖，見(jiàn)圖8)顯示其母體結(jié)構(gòu)為黃酮。

該化合物的高分辨質(zhì)譜(HR—MS圖，見(jiàn)圖9)顯示其[M+H]+為373.1262。

該化合物的核磁共振譜(NMR圖)見(jiàn)圖10，其中a圖為核磁共振氫譜圖，b圖為核磁共振碳譜圖。從圖10中的a圖可以看出該化合物中共有20個(gè)氫原子，其中化學(xué)位移值為7.92、7.90、7.05、7.04處各有1個(gè)氫，為苯環(huán)上的氫；化學(xué)位移值為6.60處有1個(gè)氫，為雙鍵上的氫；化學(xué)位移值為4.08、3.99、3.91、3.87、3.86處各有3個(gè)氫，為甲氧基上的氫。從b圖可以看出該化合物共有20個(gè)碳原子，化學(xué)位移值為164.27、1 63.72、1 53.28、149.35、149.1 3、145.60、139.65、129.04(3C)、124.51、115.67(3C)、115.40、62.64、62.59、62.20、62.15、56.06。
 

質(zhì)譜結(jié)合核磁共振譜可以看出該化合物的分子式應(yīng)為C20H20O7，經(jīng)過(guò)與文獻(xiàn)對(duì)照，可以確定該化合物為5，6，7，8，4’-五甲氧基黃酮，結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖11。
 

三、結(jié)論

目前抗氧化實(shí)驗(yàn)中，多數(shù)文獻(xiàn)是先提取再分離，然后測(cè)試活性，這種研究過(guò)程實(shí)驗(yàn)量大、周期長(zhǎng)、所耗試劑多、針對(duì)性較差，實(shí)驗(yàn)效果不明顯。本研究以清除DPPH自由基活性實(shí)驗(yàn)、亞油酸過(guò)氧化抑制實(shí)驗(yàn)、卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化抑制實(shí)驗(yàn)和大豆油氧化抑制實(shí)驗(yàn)作為抗氧化模型，遞進(jìn)篩選活性部位，逐步縮小活性范圍，得到陳皮中抗油脂氧化作用較好的單體化合物。結(jié)果表明陳皮乙酸乙酯提取物和無(wú)水乙醇提取物對(duì)DPPH清除作用較顯著，且清除率與濃度呈量效關(guān)系；將這兩種提取物分別經(jīng)柱層析分為三個(gè)洗脫部分后，由乙酸乙酯提取物所得到的三個(gè)部分對(duì)DPPH自由基的清除作用較強(qiáng)，并且對(duì)亞油酸過(guò)氧化具有抑制作用；這兩種洗脫物經(jīng)制備薄層層析法各得到三個(gè)主要化合物，由洗脫物1所得到的2個(gè)化合物及洗脫物3所得到的1個(gè)化合物對(duì)亞油酸過(guò)氧化抑制作用比其它化合物強(qiáng)，并且對(duì)卵黃脂蛋白脂質(zhì)過(guò)氧化具有抑制作用；該化合物對(duì)DPPH、亞油酸過(guò)氧化、卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化及食用油氧化均表現(xiàn)出較顯著的抑制效果，并與濃度呈較好的量效關(guān)系，當(dāng)濃度為2.00mg／mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率為72.36％，對(duì)亞油酸過(guò)氧化的抑制率為56.12％，對(duì)卵黃脂蛋白過(guò)氧化的清除率為49.21％，對(duì)大豆油氧化的抑制率為42.54％。該化合物經(jīng)IR、NMR和MS等儀器分析方法鑒定為5，6，7，8，4’-五甲氧基黃酮。該化合物具有較好的抗油脂氧化活性，有望作為食品抗氧化劑應(yīng)用于油脂工業(yè)中。將抗氧化活性較好的單體化合物添加到油脂中，不僅可以延緩油脂氧化，還可以提高油脂的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在人體內(nèi)發(fā)揮多種生理功能，降低疾病風(fēng)險(xiǎn)，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

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