②對亞油酸過氧化的抑制作用

洗脫物1～6用無水乙醇溶解，首先確定各洗脫物的飽和濃度，為了便于比較，將六種洗脫物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的貯備液，為4.05mg／mL。以維生素C做陽性對照，清除DPPH活性測定提取物1、2和3用無水乙醇溶解，提取物4用蒸餾水溶解，首先確定各提取物的飽和濃度，為了便于比較，將四種提取物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的儲備液，再用二倍稀釋法稀釋，選擇合適的測試濃度范圍，最終四個待測提取物溶液濃度取值分別為0．14、0.27、0.54、1.08和2.15mg／mL。以抗壞血酸(維生素C)為對照，清除DPPH活性測定方法：取1.0mL各待測溶液，加入3.0mL的409g／mL DPPH乙醇溶液混合，室溫避光反應(yīng)30min后于517nm下測定吸光值，計(jì)算其清除率，清除率(％)=(A₀一As)／A₀×100％，其中A₀為空白組吸光度，As為樣品組吸光度值。先測定各樣品在濃度為4.05mg／mL時(shí)對DPPH的清除作用，確定活性較好的樣品，再測定其在不同時(shí)間對亞油酸過氧化的抑制作用，具體方法參考文獻(xiàn)進(jìn)行：將1.0mL不同樣品溶液中加入3mL的2.5％亞油酸一無水乙醇溶液，混勻后置于40℃培養(yǎng)箱。每隔1d(共5d)，取出0.5mL待測樣品，加入lmL 25％TCA混勻，靜置20min后加入lmL 0.67％TBA，沸水浴加熱10min。冷卻后加入4mL正丁醇，搖勻，4000r／min室溫離心10min，取上層液于532nm處比色，同時(shí)測定不加抗氧化物的空白管吸光度，計(jì)算抑制率。抑制率(％)=(A₀—As)／～×100％，其中～為空白組吸光度、As為樣品組吸光度值。

③對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用

化合物1～6用無水乙醇溶解，首先確定各化合物的飽和濃度，為了便于比較，將六個化合物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的貯備液，為4.02mg／mL。以維生素C做陽性對照，洗脫物1～6用無水乙醇溶解，首先確定各洗脫物的飽和濃度，為了便于比較，將六種洗脫物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的貯備液，為4.05mg／mL。以維生素C做陽性對照，清除DPPH活性測定提取物1、2和3用無水乙醇溶解，提取物4用蒸餾水溶解，首先確定各提取物的飽和濃度，為了便于比較，將四種提取物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的儲備液，再用二倍稀釋法稀釋，選擇合適的測試濃度范圍，最終四個待測提取物溶液濃度取值分別為0.14、0.27、0.54、1.08和2.15mg／mL。以抗壞血酸(維生素C)為對照，清除DPPH活性測定方法：取1.0mL各待測溶液，加入3.0mL的4099／mL DPPH乙醇溶液混合，室溫避光反應(yīng)30min后于517nm下測定吸光值，計(jì)算其清除率，清除率(％)=(A₀一As)／A₀×100％，其中A₀為空白組吸光度，As為樣品組吸光度值。先測定各樣品在濃度為4.05mg／mL時(shí)對DPPH的清除作用，確定活性較好的樣品，再測定其在不同時(shí)間對亞油酸過氧化的抑制作用，具體方法參考文獻(xiàn)進(jìn)行：將1.0mL不同樣品溶液中加入3mL的2.5％亞油酸一無水乙醇溶液，混勻后置于40℃培養(yǎng)箱。每隔1d(共5d)，取出0.5mL待測樣品，加入lmL 25％TCA混勻，靜置20min后加入lmL 0.67％TBA，沸水浴加熱10min。冷卻后加入4mL正丁醇，搖勻，4000r／min室溫離心10min，取上層液于532nm處比色，同時(shí)測定不加抗氧化物的空白管吸光度，計(jì)算抑制率。抑制率(％)=(A₀—As)／～×100％，其中～為空白組吸光度、As為樣品組吸光度值。先測定各化合物溶液在相同時(shí)間對亞油酸過氧化的抑制作用，確定活性較好的樣品，再測定其在不同時(shí)間下對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用，脂質(zhì)體過氧化物采用紫外吸收測定法測定，方法參考文獻(xiàn)改進(jìn)：取新鮮雞蛋卵黃適量，加入等體積95％乙醇于37℃磁力攪拌10min，抽濾，濾液再用95％乙醇稀釋定容，使?jié)舛冗_(dá)到0.8％。取該溶液0.2mL，分別加入不同濃度待測樣品溶液各lmL，空白加入等體積的無水乙醇，再各加入0.005mol／L的硫酸銅201aL，放入水浴恒溫震蕩器中震蕩，速度為100次／min，溫度為37℃。每24h取0.1mL氧化液加入5mL乙醇，混勻后，以乙醇為空白，用1cm石英比色皿在234nm處測定吸光度值，計(jì)算抑制率。抑制率(％)=(Ao—As)／～×100％，其中Ao為空白組吸光度、As為樣品組吸光度值。

④對油脂氧化的抑制作用

配制單體化合物的飽和濃度，再用二倍稀釋法稀釋，確定最適宜濃度范圍，依次測定其在不同濃度下對DPPH的抑制作用,清除DPPH活性測定提取物1、2和3用無水乙醇溶解，提取物4用蒸餾水溶解，首先確定各提取物的飽和濃度，為了便于比較，將四種提取物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的儲備液，再用二倍稀釋法稀釋，選擇合適的測試濃度范圍，最終四個待測提取物溶液濃度取值分別為0.14、0.27、0.54、1.08和2.15mg／mL。以抗壞血酸(維生素C)為對照，清除DPPH活性測定方法進(jìn)行：取1.0mL各待測溶液，加入3.0mL的40μg／mL DPPH乙醇溶液混合，室溫避光反應(yīng)30min后于517nm下測定吸光值，計(jì)算其清除率，清除率(％)=(A₀一As)／A₀× 100％，其中A₀為空白組吸光度，As為樣品組吸光度值,對亞油酸過氧化的抑制作用洗脫物1～6用無水乙醇溶解，首先確定各洗脫物的飽和濃度，為了便于比較，將六種洗脫物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的貯備液，為4.05mg／mL。以維生素C做陽性對照，先測定各樣品在濃度為4.05mg／mL時(shí)對DPPH的清除作用，確定活性較好的樣品，再測定其在不同時(shí)間對亞油酸過氧化的抑制作用，將1.0mL不同樣品溶液中加入3mL的2.5％亞油酸一無水乙醇溶液，混勻后置于40℃培養(yǎng)箱。每隔1d(共5d)，取出0.5mL待測樣品，加入lmL 25％TCA混勻，靜置20min后加入lmL 0.67％TBA，沸水浴加熱10min。冷卻后加入4mL正丁醇，搖勻，4000r／min室溫離心10min，取上層液于532nm處比色，同時(shí)測定不加抗氧化物的空白管吸光度，計(jì)算抑制率。抑制率(％)=(Ao—As)／～×100％，其中～為空白組吸光度、As為樣品組吸光度值。對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用化合物1～6用無水乙醇溶解，首先確定各化合物的飽和濃度，為了便于比較，將六個化合物統(tǒng)一配制成較小飽和濃度值的貯備液，為4.02mg／mL。以維生素C做陽性對照，先測定各化合物溶液在相同時(shí)間對亞油酸過氧化的抑制作用，確定活性較好的樣品，再測定其在不同時(shí)間下對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用，脂質(zhì)體過氧化物采用紫外吸收測定法測定，取新鮮雞蛋卵黃適量，加入等體積95％乙醇于37℃磁力攪拌10min，抽濾，濾液再用95％乙醇稀釋定容，使?jié)舛冗_(dá)到0.8％。取該溶液0.2mL，分別加入不同濃度待測樣品溶液各lmL，空白加入等體積的無水乙醇，再各加入0.005mol／L的硫酸銅20mL，放入水浴恒溫震蕩器中震蕩，速度為100次／min，溫度為37℃。每24h取0.1mL氧化液加入5mL乙醇，混勻后，以乙醇為空白，用1cm石英比色皿在234nm處測定吸光度值，計(jì)算抑制率。抑制率(％)=(Ao—As)／～×100％，其中Ao為空白組吸光度、As為樣品組吸光度值。及對大豆油氧化的抑制作用。對大豆油氧化抑制作用，稱取10mL大豆油，加入lmL樣 品溶液，于48℃水浴恒溫22h，取樣lmL加入 2mL 0.67％TBA溶液，2mL 20％TCA，沸水浴 20min，冷卻至37℃，加入5mL CHCl₃溶液，搖 勻，3500r/min離心10min，取上清液于532nm處 測吸光度，空白用溶劑代替樣品溶液，并以維生 素C做陽性對照，計(jì)算抑制率。抑制率(％)= (A₀一As)/～×100％，其中Ao為空白組吸光度、 As為樣品組吸光度值。 

(3)單體化合物的鑒定

測定抗氧化活性較好的單體化合物的紅外光譜(IR)、核磁共振氫譜(1H—NMR)、核磁共振碳譜(13C-NMR)和質(zhì)譜(MS)并進(jìn)行分析，鑒定該化合物結(jié)構(gòu)。

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