艾葉是菊科植物艾（Artemisiaargyi）的干燥葉，氣味清香，入口較苦。艾葉具有藥食兩用價(jià)值，在傳統(tǒng)食品加工過(guò)程中常被作為食品添加劑使用。近代對(duì)艾葉的研究多集中于其中的黃酮、多糖、生物堿以及艾葉乙醇提取物上，而對(duì)艾葉中白堅(jiān)木皮醇的提取研究尚未見(jiàn)報(bào)道。在艾葉提取物生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的艾葉藥渣，本實(shí)驗(yàn)室在研究中發(fā)現(xiàn)，艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇的含量較高，使用合理的提取工藝方法可制得純度98%以上的白堅(jiān)木皮醇晶體。

白堅(jiān)木皮醇，又名2-甲氧基-L-（-）-肌醇、白雀木醇，是一種天然存在具有旋光活性的手性藥物中間體。它作為一種良好的制藥原料常被用于合成具有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的旋光性肌醇衍生物。近年來(lái)，白堅(jiān)木皮醇被發(fā)現(xiàn)具有治療癌癥、促進(jìn)細(xì)胞增殖、輔助治療糖尿病、抑菌和延緩胃損傷等作用，因此飽受醫(yī)藥行業(yè)、食品行業(yè)和化學(xué)行業(yè)學(xué)者的關(guān)注。目前，白堅(jiān)木皮醇的提取主要來(lái)自于天然橡膠乳清、荔枝和沙棘中，且含量?jī)H僅只有0.2%～1.9%，原料來(lái)源單一，提取、分離的方式大多需要使用較多的有機(jī)毒性溶劑，生產(chǎn)成本高，產(chǎn)品工藝復(fù)雜，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。

本研究以艾葉藥渣為原料，采用單因素與響應(yīng)面分析法確定艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇的最佳提取工藝條件，通過(guò)HPLC-DAD法檢測(cè)提取液中白堅(jiān)木皮醇的含量，從而確定白堅(jiān)木皮醇最佳提取工藝條件，為艾葉藥渣作為一種新原料制備白堅(jiān)木皮醇提供理論依據(jù)，使艾葉藥渣變廢為寶，提高艾葉的附加值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

艾葉：湖北桐羅堂中藥材有限公司，經(jīng)湖北師范大學(xué)張新潮副教授鑒定為菊科植物艾ArtemisiaargyiLevl.etVant.的干燥葉；95%乙醇：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈（色譜純）：賽默飛世爾科技有限公司；0.22μm微孔濾膜：天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；白堅(jiān)木皮醇標(biāo)準(zhǔn)品：sigma公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Waterse2695系列高效液相色譜儀：美國(guó)Waters公司；AB135-S分析天平：梅特勒-托利多公司；InertsilODS-SPC18柱：島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司；R205B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海鵬奕儀器有限公司；恒溫水浴鍋：上海申生科技有限公司；DF-101Z集熱式恒溫加熱磁力攪拌器：上海凌科實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司；SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器：日本島津公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

艾葉藥渣經(jīng)過(guò)105℃烘干2h，以烘干后的艾葉藥渣為提取原料，精確稱取20g艾葉藥渣，加入25倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，在80℃條件下加熱冷凝回流2.5h，共提取3次，合并提取液，即得提取液樣品。

1.3.2 白堅(jiān)木皮醇含量測(cè)定

參照董鐵山的方法，使用HPLC-DAD法測(cè)定樣品中白堅(jiān)木皮醇的含量，方法略有改動(dòng)。色譜條件：色譜柱InertsilODS-SPC18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相乙腈-水體積比為15∶85；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：190nm；進(jìn)樣量：10μL。

1.3.3 白堅(jiān)木皮醇提取率單因素實(shí)驗(yàn)

在提取次數(shù)3次，提取溫度70℃，料液比1∶20的條件下，分別考察提取時(shí)間（1h、1.5h、2h、2.5h、3h）對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響；在提取次數(shù)3次，提取時(shí)間2h，料液比1∶20的條件下，分別考察提取溫度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響；在料液比1∶20，提取時(shí)間2h，提取溫度70℃條件下，分別考察提取次數(shù)（1次、2次、3次、4次、5次）對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響；在提取次數(shù)3次，提取時(shí)間2h，提取溫度70℃條件下，分別考察料液比（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30）對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響。

1.3.4 響應(yīng)面分析法優(yōu)化白堅(jiān)木皮醇提取工藝條件

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選取對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率影響最大的三個(gè)因素設(shè)計(jì)Box-Benhnken試驗(yàn)，以提取時(shí)間（A）、提取溫度（B）和料液比（C）為自變量，設(shè)定白堅(jiān)木皮醇提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行3次提取實(shí)驗(yàn)，利用Design-ExpertV8.0.6軟件獲取最佳提取工藝條件，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表如表1所示。

1.3.5 白堅(jiān)木皮醇提取率計(jì)算

經(jīng)HPLC-DAD法測(cè)定出白堅(jiān)木皮醇的含量，按照下列公式計(jì)算不同提取條件下，白堅(jiān)木皮醇的提取率。

式中：C為樣品中白堅(jiān)木皮醇的濃度，mg/L；V為樣品提取液的體積，L；M為樣品質(zhì)量，g；W為白堅(jiān)木皮醇的提取率，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 提取時(shí)間對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響

固定提取次數(shù)3次，提取溫度70℃，料液比1∶20，考察提取時(shí)間分別在1h、1.5h、2h、2.5h、3h的條件下，白堅(jiān)木皮醇提取率的變化情況。如圖1所示，當(dāng)提取時(shí)間為1h～2.5h之間時(shí)，白堅(jiān)木皮醇提取率隨著提取時(shí)間的增加而提高；當(dāng)提取時(shí)間高于2.5h時(shí)，白堅(jiān)木皮醇的提取率隨著時(shí)間的增加而稍有下降，因此提取時(shí)間2.5h左右白堅(jiān)木皮醇提取率最佳。

2.1.2 提取溫度對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響

固定提取次數(shù)3次，提取時(shí)間2h，料液比1∶20，考察提取溫度分別在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的條件下，白堅(jiān)木皮醇提取率的變化情況。如圖2所示，當(dāng)提取溫度為50℃～80℃之間時(shí)，白堅(jiān)木皮醇提取率隨著提取溫度的增加而提高；當(dāng)提取溫度高于80℃時(shí)，白堅(jiān)木皮醇的提取率隨著溫度的增加而略有增加，綜合考慮提取成本，因此提取溫度80℃左右白堅(jiān)木皮醇提取率最佳。

2.1.3 料液比對(duì)艾葉藥渣中白堅(jiān)木皮醇提取率的影響

固定提取次數(shù)3次，提取時(shí)間2h，提取溫度70℃，考察料液比分別在1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30的條件下，白堅(jiān)木皮醇提取率的變化情況。如圖3所示，當(dāng)料液比為1∶20～1∶30之間時(shí)，白堅(jiān)木皮醇提取率隨著提取溶劑體積的提高而變化不顯著，考慮到乙醇的成本，因此選擇料液比1∶25左右白堅(jiān)木皮醇提取率最高。

相關(guān)鏈接：乙腈，乙醇，艾葉，2-甲氧基

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