2.2.2 HPLC定量檢測

前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，苦蕎麩皮黃酮精品抑菌效果優(yōu)于粗品，而兩者主要黃酮成分相同，因此對粗品及精品中蘆丁、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素和山奈酚4種黃酮單體進(jìn)行定量分析。由表3可知，經(jīng)大孔樹脂富集精制后，苦蕎黃酮精品中蘆丁、山奈酚-3-0-蕓香糖苷和槲皮素的含量均有所增加，精品的總黃酮含量可達(dá)79.50％，精制倍數(shù)可達(dá)2.84倍。

2.3 4種黃酮成分的抑菌活性研究

為明確4種黃酮成分在抑菌中的作用，測定了4種單體的抑菌活性，4種黃酮單體對6種供試菌的抑制作用具有選擇性和差異性。表4結(jié)果可知，槲皮素的抑菌活性最強(qiáng)，對5種供試菌的MIC值均為12.5mg/mL；其次是山奈酚和山奈酚-3-0-蕓香糖苷，對6種供試菌的MIC值均在25mg/mL及以下；蘆丁的抑菌活性較差，且無殺菌效果。

3 結(jié)語

苦蕎作為常見的藥食兩用作物，在食品加工中廣泛應(yīng)用，而其麩皮多被丟棄，作者探究了苦蕎麩皮黃酮類化合物對常見病原菌的抗菌活性，以期為苦蕎麩皮的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。采用平板打孔法及二倍稀釋法對苦蕎麩皮粗品及精品的抑菌活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明苦蕎麩皮黃酮粗品及精品對大腸桿菌、志賀氏桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、腸球菌6種常見致病菌均有一定抑制作用，尤其是對金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)。王麗娟等研究表明黑苦蕎中的黃酮類化合物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有較好的抑菌作用。這與本研究結(jié)果相一致。

大孔樹脂富集后苦蕎麩皮黃酮的抑菌活性明顯優(yōu)于富集前，抑菌活性的強(qiáng)弱可能與黃酮含量存在量效關(guān)系或與其黃酮成分相關(guān)。通過HPLC對苦蕎麩皮黃酮粗品與精品黃酮類化合物的成分及含量進(jìn)行分析，大孔樹脂富集前后成分無變化，主要黃酮成分均為蘆丁、山奈酚-3-0-蕓香糖苷、槲皮素和山奈酚，但精品中蘆丁、山奈酚-3-0-蕓香糖苷和槲皮素的含量均有所增加，精品的總黃酮含量可達(dá)79.50％，精制倍數(shù)可達(dá)2.84倍。測定了4種黃酮單體的抑菌活性，研究表明含量最多的蘆丁的抑菌活性不佳，槲皮素的抑菌活性更強(qiáng)。槲皮素是黃酮醇的典型代表，它已被證實(shí)具有很強(qiáng)的抗菌活性，Wang等研究發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽性細(xì)菌對槲皮素高度敏感，且研究表明剛槲皮素與氨芐西林、頭孢拉定等抗生素聯(lián)合使用對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌能夠有效降低耐藥性，提高其抗菌活性。趙曉由其等對從高良姜中分離得到的山奈酚的體外抗菌實(shí)驗(yàn)表明山奈酚對革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌具有較強(qiáng)抗菌活性。槲皮素與山奈酚對革蘭氏陽性菌的抑菌效果更強(qiáng)。

國內(nèi)外對山奈酚-3-O-蕓香糖苷抑菌活性的研究較少，本研究發(fā)現(xiàn)，山奈酚-3-0-蕓香糖苷對于常見食源性微生物顯示出一定抑菌效果。天然存在的黃酮類化合物大多以甙類形式存在，并在兩個(gè)芳環(huán)上常有-0H或-OCH取代基，其抗菌活性取決于其母體上羥基的取代程度。有研究表明黃酮分子中C4=0和C5-OH、C7-0H是抗菌活性的首要基團(tuán)，其次為C3-0H基團(tuán)，C3’-0H、C4’-0H也具備一定的抗菌活性，且類黃酮苷元比其相應(yīng)的糖苷具有更高的抗菌活性。蘆丁和山奈酚-3-0-蕓香糖苷分別是槲皮素和山奈酚對應(yīng)的糖苷，它們的差異在C3位置，上述發(fā)現(xiàn)支持本研究中單體抑菌活性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。此外，盡管蘆丁的抑菌活性弱，但有研究表明蘆丁可以增強(qiáng)黃酮類化合物的抗菌活性。Muha-mmad等發(fā)現(xiàn)蘆丁與桑黃素單獨(dú)無活性，但聯(lián)合使用對供試細(xì)菌有活性，且槲皮素與蘆丁、桑黃素三者聯(lián)合使用對供試菌的抑制作用比單獨(dú)作用有進(jìn)一步增強(qiáng)。這提示蘆丁可能通過增強(qiáng)其他3種黃酮化合物的抑菌活性，使苦蕎麩皮黃酮精品的抑菌活性優(yōu)于粗品。
通過對苦蕎麩皮總黃酮及其有效成分的抑菌活性的分析，發(fā)現(xiàn)苦蕎麩皮黃酮在抗菌方面具有廣泛的應(yīng)用潛力。使用大孔樹脂純化后可以有效提升其抑菌活性，苦蕎麩皮黃酮的抗菌活性成分蘆丁、山奈酚-3-0-蕓香糖苷、槲皮素和山奈酚的抑菌能力大小具有一定的構(gòu)效關(guān)系.但4種黃酮單體的協(xié)同抑菌機(jī)理及苦蕎麩皮黃酮的體內(nèi)抗菌活性有待進(jìn)一步研究。本研究表明苦蕎麩皮通過浸提、濃縮、精制等技術(shù)手段，能很大提高其抑菌功能活性，提升其附加值，是一種有深度開發(fā)價(jià)值的天然抑菌資源。

相關(guān)鏈接：山奈酚-3-O-蕓香糖苷，蘆丁，槲皮素，金黃色葡萄球菌

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