志賀氏菌(shigella)是人類重要的腸道致病菌之一，食物源性的痢疾爆發(fā)(即志賀氏菌食物中毒)，主要是食用了被污染該菌的食品和水所致，其檢驗(yàn)方法一般為增菌、分離、生物學(xué)試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定。

一、檢驗(yàn)方法

(一)操作步驟

1、增菌。稱取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶內(nèi)(固體食品應(yīng)用均質(zhì)器以8000--10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品應(yīng)用滅菌金屬匙或玻璃棒研磨使其乳化)，于36±1℃培養(yǎng)6～8h。

2、分離。取增菌液l環(huán)，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板一個，麥康凱瓊脂平板或伊紅美藍(lán)瓊脂平板一個，于36±1℃培養(yǎng)18～24h。志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無色透明不發(fā)酵乳糖的菌落。

3、生物化學(xué)試驗(yàn)。挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和半固體各一管，一般應(yīng)多挑幾個菌落以防遺漏。志賀氏菌屬在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果為底層產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣(福氏志賀菌6型可微產(chǎn)氣)，斜面產(chǎn)堿，不產(chǎn)生硫化氫，無動力，在半固體管內(nèi)沿穿刺線生長。具有以上特性的菌株，疑為志賀氏菌，可做血清凝集試驗(yàn)。

在做血清學(xué)試驗(yàn)的同時，應(yīng)進(jìn)一步做苯丙氨酸脫氨酶、賴氨酸脫妒酶，西蒙氏檸檬酸鹽和葡萄糖銨尿素、KCN、水楊苷、七葉苷試驗(yàn)，志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng)。必要時應(yīng)做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌，并以生化試驗(yàn)方法做4個生化群的鑒定。

4、血清學(xué)試驗(yàn)。挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。先用四種志賀氏菌多價血清檢查，如果由于K抗原的存在而不出現(xiàn)凝集，應(yīng)將菌液煮沸后再檢查，再用A1、A2、B群多價和D群血清分別試驗(yàn)，如系B群：福氏志賀氏菌，則用群和型因子血清分別檢查，確定菌型。

四種志賀氏菌多價血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價血清1，2，3分別檢查，并進(jìn)一步用1～15各型因子血清確定菌型，如果不是鮑氏志賀氏菌，可用痢疾志賀氏菌3～12型多價血清及各型因子血清檢查。

5、結(jié)果報告：綜合以上生化和血清學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果，判定型別并作出報告。

如果生化試驗(yàn)判定為痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌，由于血清種類不全而未獲得血清學(xué)分型的最后結(jié)果時，可報告為“痢疾(或鮑氏)志賀氏菌，型別待定”，并送有條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步鑒定。

(二)檢驗(yàn)程序

二、結(jié)果分析判定

(一)一般培養(yǎng)性狀

志賀氏菌為需氧性革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在普通培養(yǎng)基上易于生長最適pH為6．4～7．8，最適溫度為37℃，于10～40℃均能繁殖，在選擇性或鑒別培養(yǎng)基上為無色，半透明，微凸起，光滑，濕潤，邊緣整齊，直徑約2mm大小的菌落，但宋內(nèi)氏志賀氏菌常出現(xiàn)R形菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻混濁，無鞭毛，無動力。

(二)增菌與分離

志賀氏菌因在食品中的存活期較短，當(dāng)樣品采集后應(yīng)盡快進(jìn)行檢驗(yàn)，如不能立即檢查時，可將標(biāo)本放入冰箱保存。對該菌的檢驗(yàn)至今還沒有很好的增菌方法，一般采用GN增菌液，縮短增菌時間，6～8h增菌液內(nèi)細(xì)菌輕微生長，即可接種鑒別平板，以免時間較長，其他腸道非致病細(xì)菌生長過多而影響志賀氏菌的分離。

用于分離鑒別的培養(yǎng)基，一般不少于兩個，采用中等選擇性的HE或SS瓊脂平板和弱選擇性的麥康凱或EMB瓊脂平板，以利于志賀氏菌的陽性檢出率。

(三)生化學(xué)性狀

根據(jù)志賀氏菌的生化學(xué)特性，均能發(fā)酵葡萄糖，不產(chǎn)生氣體(少數(shù)福氏6型能產(chǎn)生少量氣體)，不發(fā)酵水楊苷和側(cè)金盞花醇，不分解尿素，不產(chǎn)生硫化氫，在西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基上不生長，V-P為陰性，不發(fā)酵乳糖(宋內(nèi)氏志賀氏菌可遲緩發(fā)酵)，不能使賴氨酸脫羧，宋內(nèi)氏菌和鮑氏B型可使鳥氨酸脫羧，其他均為陰性。

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