凝膠滲透層析是利用多孔的凝膠聚合物將化合物按分子大小選擇性分離的機(jī)制，即由于大分子化合物不能進(jìn)入填料粒子的孔內(nèi)，溶劑淋洗時(shí)只能在粒子間隙通過，而小分子化合物能在粒子孔內(nèi)穿行，二者運(yùn)行路徑的距離不一樣，大分子的路徑短，最先流出，小分子的路徑長，最后流出。這樣就能把最先流出的大分子化合物除去而得到凈化。農(nóng)藥殘留樣品凈化中最常用的凝膠滲透層析填料是各種不同孔徑大小和粒子大小的苯乙烯-二乙烯苯共聚物(SDVB)，如SX-3，通過控制其聚合時(shí)的交聯(lián)度來獲得所需孔徑的凝膠粒子。由于大多數(shù)農(nóng)藥的分子質(zhì)量都在400u以下，選擇一定孔徑的填料就可很容易地去除提取液中分子質(zhì)量在400u以上的雜質(zhì)。淋洗劑一般用二氯甲烷、1：1二氯甲烷-環(huán)戊烷或1：1乙酸乙酯-環(huán)戊烷。

使用凝膠滲透層析進(jìn)行凈化處理不存在不可逆保留問題，而且一根柱子可以重復(fù)使用上千次，速度快、成本低，適用于動(dòng)植物組織、果蔬、加工食品、土壤、牛奶、血液、水等幾乎所有樣品的凈化處理。現(xiàn)已有商業(yè)化凝膠滲透層析自動(dòng)凈化裝置面市，可同時(shí)處理60個(gè)樣品，非常方便、快速。

(二)液液分配法

液液分配凈化法(1iquid-liquid partition)的原理和操作都和前面介紹的液液提取完全一樣。比如農(nóng)藥與脂肪、蠟質(zhì)、色素等一起被己烷提取后，再用一種極性溶劑(如乙腈)與其共同振搖時(shí)，由于農(nóng)藥的極性比脂肪、蠟質(zhì)、色素等要大一些，因而大部分被極性溶劑(乙腈)所提取，經(jīng)幾次提取后，農(nóng)藥幾乎可以完全地與脂肪等雜質(zhì)分離，從而達(dá)到凈化的目的。

在應(yīng)用液液分配凈化時(shí)，要注意農(nóng)藥的p在不同溶劑對中的分布情況是不相同的。對異辛烷-80％丙酮、戊烷-90％乙醇、己烷-乙腈、異辛烷-二甲基甲酰胺、異辛烷-85％二甲基甲酰胺和己烷-90％二甲基亞砜6種溶劑對的研究結(jié)果表明，在異辛烷-80％丙酮和戊烷-90％乙醇溶劑對中，各種農(nóng)藥的p很分散。這種情況有利于對不同農(nóng)藥的分離或是單殘留樣品的凈化。在己烷-乙腈、異辛烷-二甲基甲酰胺等溶劑對中，大部分的農(nóng)藥p均較小，特別是在異辛烷-二甲基甲酰胺溶劑對中，約有3／4的農(nóng)藥p小于0.21，這樣的p有利于農(nóng)藥殘留量分析中的凈化。對于異辛烷-85％二甲基甲酰胺等溶劑對，大部分的農(nóng)藥p增加，平均增大4倍。同樣在異辛烷-80％丙酮溶劑對中，有一半農(nóng)藥的p在0.6以上，這說明當(dāng)極性溶劑的親水性增強(qiáng)時(shí)，農(nóng)藥在非極性溶劑中的溶解度也就增大。

比較典型的己烷-二甲基甲酰胺溶劑對液液分配凈化的操作步驟如下。

取己烷提取含脂肪等雜質(zhì)的農(nóng)藥樣品的提取液25 mL，用預(yù)先經(jīng)己烷飽和過的二甲基甲酰胺在分液漏斗中提取3次，每次10 mL。合并二甲基甲酰胺提取液，放入另一個(gè)分液漏斗中，再另用10 mL己烷洗滌提取，以除去少量殘留脂肪。靜置分層后，分出己烷層。另用10 mL二甲基甲酰胺提取分出的己烷層。合并40 mL二甲基甲酰胺提取液。放人500 mL分液漏斗中，加入200mL 2％硫酸鈉溶液及10 mL己烷。強(qiáng)烈振搖2 min，靜置20 min，棄去二甲基甲酰胺水溶液。被凈化的農(nóng)藥轉(zhuǎn)人己烷溶液中，以備下一步處理。

(三)吹掃共餾法

吹掃捕集和頂空法是從水樣或不易揮發(fā)的基體中提取揮發(fā)性分析物的方法，而吹掃共餾法(sweep codistillation)則是與其原理相同的凈化技術(shù)，用于除去揮發(fā)性較低的雜質(zhì)。

吹掃共餾法是在惰性氣體和溶劑蒸氣流的作用下使農(nóng)藥從脂類和其他低揮發(fā)性提取成分中揮發(fā)出來，然后通過冷凝或吸附柱將其收集，使農(nóng)藥與雜質(zhì)得到分離。這一技術(shù)最早是由Storherr等(1965)應(yīng)用于有機(jī)磷酸酯農(nóng)藥的凈化。把提取物溶于適當(dāng)?shù)娜軇?如乙酸乙酯)中，由進(jìn)樣口注入分餾管的內(nèi)管中，殘留農(nóng)藥在一定的溫度下被強(qiáng)制揮發(fā)，隨載氣和溶劑蒸氣流經(jīng)裝有硅烷化玻璃棉或玻璃珠的外管，最后進(jìn)入裝有弗羅里硅土吸附劑的收集管中，而油脂等低揮發(fā)性物質(zhì)則留在分餾管外管的玻璃棉(珠)上。取下收集管，用適當(dāng)溶劑洗脫農(nóng)藥用于測定，或直接與氣相色譜儀(GC)連接，通過瞬間加熱解吸用于分析。近年，隨著對共餾溫度、載氣流速、冷凝回收控制技術(shù)的提高，這一方法對動(dòng)植物樣品中有機(jī)氯、有機(jī)磷、三嗪類和其他農(nóng)藥，包括人乳中的多氯苯類，試驗(yàn)顯示有很好的回收率?？梢哉f，只要所測農(nóng)藥有一定的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性，就可采用這一技術(shù)進(jìn)行凈化。

(四)沉淀凈化法

沉淀凈化法(precipitation cleanup method)是在低溫下，脂肪和蠟質(zhì)會(huì)形成結(jié)晶，故而可以將其從溶解度較高的農(nóng)藥提取物中去除。對動(dòng)植物樣品很典型的一個(gè)操作步驟就是，用丙酮提取，然后放入-80℃環(huán)境，脂類和某些色素就會(huì)沉淀出來。此法可以替代多脂肪樣品凈化中的液液分配。

(五)化學(xué)凈化法

化學(xué)凈化法(chemical cleanup method)是針對動(dòng)物樣品的，用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿將樣品基體消解掉，留下農(nóng)藥母體或其可測知降解物的凈化方法。這些方法主要是早期在測定穩(wěn)定的有機(jī)氯農(nóng)藥而建立的。例如毒殺芬、氯丹、艾氏劑、七氯的分析，先用發(fā)煙硫酸處理提取物，使脂類和色素物質(zhì)水解后除去。同樣，濃堿也用于脂類的水解(皂化)。有些酶(如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶)可用來降解凈化樣品中的肽類雜質(zhì)。

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