防腐劑的定義是為防止食品腐敗變質(zhì)而加入食品中的化學(xué)合成或天然物質(zhì)，具有殺死某些微生物或抑制其生長的作用，可延長食品保質(zhì)期，主要用于糕點(diǎn)、飲料、乳制品、糧食加工品、罐頭、方便食品、調(diào)味品等的防腐保鮮。按標(biāo)準(zhǔn)核定使用防腐劑，對(duì)人體健康無害，不影響人體消化道菌群，在消化道內(nèi)可降解為食物的正常成分，食品熱處理時(shí)，不產(chǎn)生有害成分。但是一些不法商家存在超量或者違規(guī)添加著色劑、防腐劑、甜味劑等現(xiàn)象，最常見的防腐劑是苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸，甜味劑糖精鈉在一些小作坊也會(huì)有添加，特別是糕點(diǎn)類食品。

近幾年，食品安全問題漸漸被老百姓重視，監(jiān)管部門也加大了監(jiān)管的力度，食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)把這4類食品添加劑立為常檢項(xiàng)目，根據(jù)GB2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定，糕點(diǎn)以及面包中山梨酸最大使用量為1.0g/kg，脫氫乙酸最大使用量為0.5g/kg，苯甲酸及糖精鈉無規(guī)定，均為不得檢出，目前，對(duì)于糕點(diǎn)中這4種防腐劑和甜味劑的高效液相色譜法檢測(cè)已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，液相色譜法前處理簡單，儀器普及率高，因而研究最詳細(xì)，應(yīng)用前景最廣，而且針對(duì)同時(shí)檢測(cè)這4種防腐劑和甜味劑的方法也有部分標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行研究.

但是，采用液相色譜法，雜質(zhì)干擾會(huì)導(dǎo)致脫氫乙酸色譜峰拖尾現(xiàn)象，由于糕點(diǎn)類樣品基質(zhì)復(fù)雜，在進(jìn)行樣品前處理時(shí)，如果雜質(zhì)干擾沒有很好的去除干凈，將會(huì)影響需要分析的目標(biāo)峰，使目標(biāo)峰的分離度達(dá)不到要求，甚至這些雜質(zhì)會(huì)影響色譜柱以及儀器的使用壽命，所以在進(jìn)行色譜分析之前，對(duì)糕點(diǎn)類樣品進(jìn)行前處理優(yōu)化顯得尤為重要，本研究重在進(jìn)行樣品前處理優(yōu)化，通過提取溶劑、蛋白沉淀劑、提取時(shí)間、凈化方式等4個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化，確定糕點(diǎn)類樣品的前處理方案，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以得到一個(gè)能夠高效去除樣品中雜質(zhì)，不影響目標(biāo)峰分析，實(shí)現(xiàn)各目標(biāo)峰峰型較好、分離度達(dá)到要求的樣品前處理方法。

一、材料與方法

1、材料與試劑

樣品來源：本中心2019年度國抽檢驗(yàn)樣品，其中的三類糕點(diǎn)：無奶油蛋糕或面包、辣條、月餅，共30個(gè)批次。試劑：甲醇(色譜純)、無水乙醇(色譜純)、正己烷(色譜純)均為默克股份兩合公司；乙酸銨(優(yōu)級(jí)純)：廠家為上海麥克林生化有限公司，亞鐵氰化鉀(分析純)、乙酸鋅(分析純)、氫氧化鈉(分析純)：廠家均為國藥集團(tuán)有限公司；氨水(分析純)，廣東光華科技股份有限公司；固相萃取小柱QasisPrimeHLB，6CC/200mg，廠家為Waters公司。對(duì)照品的來源：苯甲酸，批號(hào)：B0003771，含量：99.8％，CAS號(hào)：65-85-0，EXP：2021-07-27，廠家：BePurel山梨酸，批號(hào)：B00019552741，含量：99.7％，CAS號(hào)：110-44-1，EXP：2020-11-08，廠家：BePure；糖精鈉，批號(hào)：1121904，含量：86.24％，CAS號(hào)：128-44-9，EXP：202105-15，廠家：TMstandard；脫氫乙酸，批號(hào)：80430100，含量：99.0％，CAS號(hào)：520-45-6，EXP：2020-03-17，廠家：ANPEL。

2、儀器與設(shè)備

Waterse2695高效液相色譜儀帶PDA2998檢測(cè)器，美國Waters公司lUNIVERSAL320R低溫離心機(jī)lMilli-QAl0純水機(jī)，Millipore公司；超聲清洗儀S300H，Elma公司；渦旋振蕩器MS3，IKA公司。

3、方法

（1）對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精密稱取苯甲酸對(duì)照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0471mg/mL的苯甲酸儲(chǔ)備液；稱取山梨酸對(duì)照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.069mg/mL的山梨酸儲(chǔ)備液；稱取糖精鈉對(duì)照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.9007mg/mL的糖精鈉儲(chǔ)備液，糖精鈉相對(duì)分子質(zhì)量為205.16，糖精相對(duì)分子質(zhì)量為182.16，兩者折算系數(shù)為0.8874，故折算為糖精濃度為1.6867mg/mL；稱取脫氫乙酸對(duì)照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氫氧化鈉4mL溶解，用水定容至刻度，即得濃度為2.0477mg/mL的脫氫乙酸儲(chǔ)備液。

（2）混合標(biāo)準(zhǔn)使用液的制備

精密量取苯甲酸對(duì)照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0471mg/mL的苯甲酸儲(chǔ)備液；稱取山梨酸對(duì)照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0690mg/mL的山梨酸儲(chǔ)備液；稱取糖精鈉對(duì)照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.9007mg/mL的糖精鈉儲(chǔ)備液，糖精鈉相對(duì)分子質(zhì)量為205.16，糖精相對(duì)分子質(zhì)量為182.16，兩者折算系數(shù)為0.8874，故折算為糖精濃度為1.6867mg/mL；稱取脫氫乙酸對(duì)照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氫氧化鈉4mL溶解，用水定容至刻度，即得濃度為2.0477mg/mL的脫氫乙酸儲(chǔ)備液，對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0mL至100mL容量瓶中，以水定容。

（3）標(biāo)準(zhǔn)線性的制備

分別精密量取苯甲酸對(duì)照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0471mg/mL的苯甲酸儲(chǔ)備液；稱取山梨酸對(duì)照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0690mg/mL的山梨酸儲(chǔ)備液；稱取糖精鈉對(duì)照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.9007mg/mL的糖精鈉儲(chǔ)備液，糖精鈉相對(duì)分子質(zhì)量為205.16，糖精相對(duì)分子質(zhì)量為182.16，兩者折算系數(shù)為0.8874，故折算為糖精濃度為1.6867mg/mL；稱取脫氫乙酸對(duì)照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氫氧化鈉4mL溶解，用水定容至刻度，即得濃度為2.0477mg/mL的脫氫乙酸儲(chǔ)備液，對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0mL至100mL容量瓶中，以水定容的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液0.00mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL，分別至10mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得到標(biāo)準(zhǔn)線性，見圖3。

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